目的:本实验在体外细胞培养的水平上,观察搜风祛痰中药对同型半胱氨酸诱导大鼠心肌微血管内皮细胞损伤的干预作用以及氧化应激机制的研究,进一步探讨搜风祛痰中药对冠脉微循环障碍的作用机制,为临床应用搜风祛痰中药治疗冠脉微循环障碍提供理论依据。材料与方法:将40只SPF级雄性SD大鼠按体重随机分为空白对照组、搜风祛痰中药低剂量组、搜风祛痰中药中剂量组、搜风祛痰中药高剂量4组,每组各10只。搜风祛痰中药低剂量组、搜风祛痰中药中剂量组、搜风祛痰中药高剂量组分别予以搜风祛痰中药低剂量4.05g/kg、搜风祛痰中药中剂量8.1g/kg、搜风祛痰中药高剂量16.2g/kg和生理盐水进行灌胃,按照每天灌胃二次的方法连续灌胃七天。灌胃第七天,给药一小时后提取血清,提取血清的方式是麻醉大鼠通过腹主动脉取血,将获得血清在无菌环境中分离、加热灭活。将购买的大鼠心肌微血管内皮细胞进行传代培养、冷冻及复苏,分为空白对照组、模型组及搜风祛痰中药低、中、高剂量组,对各组大鼠心肌微血管内皮细胞进行同型半胱氨酸干预(空白对照组除外),进行同型半胱氨酸干预后空白对照组、模型组细胞与大鼠空白血清共同培养24h;搜风祛痰中药低剂量组、搜风祛痰中药中剂量组、搜风祛痰中药高剂量组分别用搜风祛痰中药低剂量组、搜风祛痰中药中剂量组、搜风祛痰中药高剂量组含药血清与细胞共同培养24h,将细胞收集后留存备用,以便于后续指标检测。使用倒置显微镜观察细胞形态,通过CD31免疫荧光法对大鼠心肌微血管内皮细胞进行辨别、鉴定,阳性率达95%以上,用于后续实验。将正常培养的大鼠心肌微血管内皮细胞随机分为空白对照组(Control)、模型组(Model)、搜风祛痰中药低剂量组(SFQTZY-L)、搜风祛痰中药中剂量组(SFQTZY-M)、搜风祛痰中药高剂量组(SFQTZY-H)。分别采用MTT法检测各组细胞的存活率、TBA法检测细胞上清中丙二醛(MDA)含量、羟胺法检测细胞上清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、RT-PCR检测内皮素-1(ET-1)水平和Elisa法检测一氧化氮(NO)表达水平的变化。结果:1.大鼠心肌微血管内皮细胞的形态及鉴定:将购买的RCMECs培养至第48h时,使用倒置显微镜观察,可见未融合状态下单个微血管内皮细胞单层排列呈梭形、星型或多角形,培养至第5天,可见典型的铺路石样。使用CD31免疫荧光法对细胞进行鉴定,鉴定结果显示,所提取的大鼠心肌微血管内皮细胞纯度大于95%。2.同型半胱氨酸浓度的确定:分别向细胞中加入不同浓度Hcy,干预24h后,测定细胞OD值。与正常大鼠心肌微血管内皮细胞比较,加入Hcy不同浓度后细胞OD值逐渐下降,尤以1mmol/L时细胞OD值最低,故确定Hcy的浓度为1mmol/L3.MTT法检测细胞活性:与空白对照组比较,模型组OD值显著降低(P<0.01);与模型组比较,搜风祛痰中药各剂量组OD值均显著升高(P<0.01)。4.TBA法测细胞上清MDA含量:与空白对照组比较,模型组细胞上清液MDA含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,搜风祛痰中药各剂量组细胞上清液MDA含量均显著降低(P<0.01)。5.羟胺法测细胞上清中SOD活性:与空白对照组比较,模型组细胞上清液SOD活性显著降低(P<0.01),与模型组比较搜风祛痰中药各剂量组细胞上清液SOD活性均显著升高(P<0.01)。6.RT-PCR检测大鼠心肌微血管内皮细胞ET-1 m RNA水平:与空白对照组比较,模型组ET-1 m RNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较搜风祛痰中药各剂量组ET-1m RNA表达均显著降低(P<0.01)。7.Elisa法检测大鼠心肌微血管内皮细胞NO表达水平:与空白对照组比较,模型组NO表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,搜风祛痰中药各剂量组NO表达均显著升高(P<0.01)。结论:1.搜风祛痰中药含药血清对Hcy诱导大鼠心肌微血管内皮细胞损伤具有保护作用。2.搜风祛痰中药含药血清能够上调细胞上清液SOD活性,下调细胞上清液MDA含量;说明搜风祛痰中药可能通过改善氧化应激反应缓解冠脉微循环障碍。3.搜风祛痰中药含药血清能够下调ET-1 m RNA表达,上调NO表达;表明搜风祛痰中药可能通有效改善内皮功能障碍进而改善冠脉微循环障碍。