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背景与目的:CD200分子与其受体CD200R蛋白属于高度保守的免疫超家族成员,是一种I型膜糖蛋白,胞膜外区有两个免疫球蛋白样结构域。CD200在人类和啮齿类动物均有表达,广泛分布于中枢神经系统神经元细胞、活化的T细胞、B细胞、滤泡树突细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞等,但D200R表达相对局限,主要分布于髓系来源的细胞（如树突细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、肥大细胞等）及淋巴细胞。研究证明,CD200/CD200R在自身免疫性疾病、炎症反应、肿瘤的发生、发展与转移等许多疾病中起重要作用。CD200与CD200R的相互作用激活细胞内抑制性信号通路,可募集Ras GAP,最终产生细胞抑制效应。CD200R的激活促进T细胞向Treg（Regulatory cell,Treg）方向分化,使Th1（Helper T cell 1,Th1）型细胞向Th2（Helper T cell 2,Th2）型细胞方向分化,促进抗炎因子IL-10（Interleukin-10,IL-10）、TGF-β（Transforminggrowthfactorβ1,TGF-β）的生成,为机体维持免疫自稳所必需。本研究构建并表达纯化了CD200R蛋白胞外域结构,并运用蛋白质免疫印迹法对所表达纯化的蛋白进行验证,为进一步研究CD200R的生物学功能提供工具。方法:1、真核表达质粒p Sectag2A-CD200R的构建与表达在NCBI数据库中查找人CD200R胞外氨基酸序列,经密码子优化得到其核酸序列后进行全基因序列合成获得CD200R胞外域c DNA片段,插入真核表达载体p Sectag2A。重组质粒p Sectag2A-CD200R测序正确后转入CHO细胞（Chinese hamster ovary cell,CHO）中,获得高表达细胞株。2、重组CD200R蛋白的纯化及验证将重组质粒转入CHO细胞,收集上清,经亲和层析法获得纯化的重组CD200R蛋白,运用蛋白质免疫印迹法对所表达纯化的蛋白进行验证。研究结果:1.全基因合成了CD200R胞外域结构c DNA,成功构建了重组质粒p Sectag2A-CD200R,测序结果与NCBI（National Center for Biotechnology Information,NCBI）数据库（EAW79659.1、NP620161.1）中公布的一致。2.运用脂质体MAX试剂将构建的重组质粒p Sectag2A-CD200R转染至CHO细胞中,利用亲和层析（镍柱）纯化细胞培养上清液,SDS-PAGE（Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）在约45k D处可见蛋白条带,蛋白质免疫印记（Western-Blot,WB）分析可见同样大小的特异性条带,且能与组氨酸（Histidine,HIS）标签特异性结合,表明成功建立细胞系CHO/p Sectag2A-CD200R,并获得人CD200R胞外域蛋白。结论:1.通过全基因合成获得CD200R胞外域基因,利用基因重组技术插入p Sectag2A分泌性表达质粒中,成功构建了p Sectag2A-CD200R重组真核表达载体。2.利用MAX试剂将重组质粒转染CHO细胞,得到稳定表达CD200R胞外域蛋白的CHO/p Sectag2A-CD200R细胞系。3.利用蛋白质亲和手段,制备出足量的重组CD200R蛋白,为进一步研究CD200R的生物学功能提供工具。