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目的：本研究拟表达出表达量高、抗原性强的可溶蛋白用于建立检测戊型肝炎IgM的ELISA方法。对用辣根过氧化物酶标记的抗原建立的戊型肝炎IgM抗体捕获法进行评价。
方法：1、抗原的获得：扩增戊型肝炎病毒相关结构基因片段，插入原核细胞表达载体硫氧还蛋白融合表达载体中，在大肠杆菌中表达不同的硫氧还蛋白融合蛋白，并对表达的蛋白进行纯化、用阴、阳性血清，检测蛋白的抗原性。
2、抗体捕获法的建立：用辣根过氧化物酶标记抗原。在酶标板上包被抗人IgM μ链，捕获戊型肝炎急性血清中的IgM，与HRP-抗原反应，显色，测OD值。建立戊型肝炎病毒IgM捕获法。并对其敏感性、特异性、稳定性和重复性进行评价。
结果：1、设计引物，分别PCR扩增了三段戊型肝炎病毒结构区基因片段：
2N：ORF2N端（23aa-150aa）；
5aA：ORF2C端（614aa-660aa）；
5aA3：ORF3C端（83aa-123aa）+ORF2C端（614aa-660aa）。
2、重组质粒的构建和融合抗原的表达及纯化
目的基因片段与载体连接，转化Ecoli.BL21钙化菌。诱导表达了四种不同的硫氧还蛋白融合蛋白5aA3、5aA、E2N、E2N5，其中E2N5是E2N的二聚体，含有ORF2N端和ORF3C端基因翻译的蛋白。分别进行初步纯化和精细纯化，用抗原包被酶标板，用间接法检测血清。
3、用辣根过氧化物酶标记5aA3抗原建立戊型肝炎IgM抗体捕获法。
4、对建立的HEV抗体捕获法进行评价：
①检测HEV IgM阳性的戊肝病人血清评价敏感性；检测HEV IgG阳性但IgM阴性的血清、HAV IgM阳性的血清、HBc IgM阳性血清评价特异性。
②试剂放置在37℃，评价稳定性。
③计算批内变异系数和批间变异系数，评价重复性。
结论：1、成功构建了戊型肝炎病毒硫氧还原蛋白重组质粒。
2、成功表达和纯化了戊型肝炎病毒硫氧还原蛋白融合抗原。其中5aA3蛋白表达量高，纯化效果好，抗原性强，可溶，质量符合要求，能够用于建立HEV IgM抗体捕获法。
3、初步建立了基于HRP-5aA3的HEV IgM抗体捕获法。