没食子酸对胃癌细胞株SGC7901生物学行为的影响

来源 :甘肃中医药大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:yangminfeng_1
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目的:恶性肿瘤疾病严重威胁人类健康,目前对其治疗采取的方式有外科手术切除癌灶、放射疗法、化学疗法、以及基因疗法。现在临床上使用的大多数化疗药靶向性并不明确,不仅杀死了肿瘤细胞,正常细胞也被杀死,对人体伤害大。于是寻找一种靶向作用明确,高效低毒的抗肿瘤药物,尽量减少对身体的伤害正成为目前抗肿瘤药物的研究方向[1]。据报道,胃癌的发病在全球范围内都比较常见,所有的恶性肿瘤中胃癌的发病率居第四[2]。美国2013年新发胃癌超过21600例,因胃癌死约10990人[3]。发生于消化道的肿瘤有很多种,恶性肿瘤也很多,在这些恶性肿瘤中,最常见且发病率最高的是胃癌,在男女之间胃癌的发病有很大的差距,男性患胃癌的概率是女性的两倍,目前已经报道的胃癌患者年龄分布比较广泛,但是当年龄达到五十岁以上后患胃癌的概率明显增大[4]。大多数患者发现时已经到了中晚期,出现了癌细胞的转移,甚至会侵入其他的器官和组织,因此错失手术治疗的最佳时机,因此胃癌的药物治疗越来越受到国内外广大学者的重视[5]。关于没食子酸(3,4,5-三羟基苯甲酸)的报道应经非常多,国内外很多学者都有研究,根据目前的报道已经表明它是一种有机酸,英文名字是Gallic acid,简称GA。在山茱萸中含量比较丰富,除此之外的其他的中草药,如藏药红景天等含量也比较丰富。近年来的相关研究发现没食子酸在多种疾病治疗方面存在一定的潜力,尤其是没食子酸的抗肿瘤作用更是受到国内外学者的广泛关注[6],GA对肿瘤细胞的生长有一定的阻碍作用,但是它在作用于癌细胞时对正常细胞的影响非常小,因此有望将其研制成一种新型的肿瘤治疗药物应用于临床[7]。本研究通过探讨没食子酸对胃癌细胞株SGC7901生物学行为的影响,以及产生这些影响的相关机制的研究,指导胃癌的临床治疗。方法:本实验以胃癌细胞株SGC7901作为实验对象,将细胞培养起来后,取对数期细胞用于实验,用MTT法检测没食子酸对胃癌细胞增殖的影响,并得出没食子酸作用于细胞的有效浓度;transwell实验检测没食子酸对胃癌细胞侵袭的影响;采用流式细胞仪检测没食子酸作用于胃癌细胞后周期和凋亡的变化;Western Blot检测没食子酸作用后胃癌细胞Cyclin D1蛋白的表达。结果:1.MTT法检测GA作用于胃癌细胞后细胞生长发生的变化:GA作用后24小时,调整GA浓度分别为1.6、3.2、6.4、12.8、25.6μg/m L时,对胃癌细胞生长情况的影响可用抑制率来表达:13.3%、20.5%、36.6%、48.7%、49.9%(p<0.05);没食子酸作用后48小时,当没食子酸浓度分别为1.6、3.2、6.4、12.8、25.6μg/mL时,对胃癌细胞SGC7901的抑制率分别为:18.9%、29.6%、47.7%、68.8%、70.2%(p<0.05);没食子酸作用后72小时,当没食子酸浓度分别为1.6、3.2、6.4、12.8、25.6μg/mL时,对胃癌细胞SGC7901的抑制率分别为:33.1%、44.3%、67.9%、76.8%、77.8%(p<0.05)。2.ranswell小室实验检测GA作用于胃癌细胞后细胞的侵袭能力的变化,取没食子酸浓度为0、6.4、12.8μg/ml,胃癌细胞SGC7901发生迁移的细胞数分别为:139.25±20.55,84.75±19.94,59.00±8.91个,与对照组比较差异具有统计学意义(F=22.406,p=0.000)。3.GA作用于SGC7901细胞后,细胞周期出现的变化可通过流式细胞仪来测得,结果显示G0/G1期细胞数目与GA浓度呈正比。当没食子酸浓度为0ug/ml、6.4ug/ml、12.8ug/ml时,G0/G1的比例分别为:56.84%、62.58%、68.03%,呈递增趋势,差异具有统计学意义(p<0.05)。4.GA作用后,可测得细胞凋亡出现的变化,结果显示胃癌细胞发生早期凋亡的细胞数目与所加的没食子酸浓度呈正相关。当没食子酸浓度为0ug/ml、6.4ug/ml、12.8ug/ml时,SGC7901细胞早期凋亡率分别为2.54%、3.54%、10.22%。有明显差异(p<0.05)。5.Western Blot法测定胃癌细胞SGC7901中Cyclin D1蛋白的表达:对添加GA的胃癌细胞SGC7901进行提蛋白,GA浓度为0、6.4、12.8μg/ml,实验以β-actin蛋白为内参,相比于对照组,Cyclin D1相对表达依次为:1.05±0.04,0.96±0.04,0.75±0.22,对结果采用ImageJ图像处理软件进行灰度分析,发现胃癌细胞SGC7901经没食子酸处理后Cyclin D1表达显著降低,差异具有统计学意义(F=90.315,p=0.000)。结论:没食子酸可以阻碍胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭,可促进细胞的凋亡,影响细胞周期,其机制可能是阻碍了Cyclin D1基因蛋白的表达。
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