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酶能在十分温和的条件下,高效率地催化各种生物化学反应,促进生物体的新陈代谢,但是酶与底物作用的活性,受温度、pH值、酶液浓度、底物浓度、酶的激活剂或抑制剂等许多因素的影响。粘度因素作为反应环境的一个特征参量,也能对酶活性产生一定的影响。特别是在生物体内,它便成为变成一个不可忽视的因素。因此研究在粘度环境下酶活性及酶量测量具有很大的现实意义。
在本文的研究中,利用α-淀粉酶作为研究材料,以甘油作为粘度剂,利用两种方法来对相应的酶活做测定。首先利用DNS法对不同粘度剂环境下的酶活性分别测量。同时对溶液的相关信息,如粘度和温度进行测量,然后,我们通过自制的偏振器,利用荧光偏振技术对标记上荧光探针的淀粉底物进行测量和研究,研究不同粘度环境对酶活性的影响,可以更好地模拟体内环境的一些特征参数。
通过实验的结果及分析我们发现:
1.在一定反应温度下,α-淀粉酶反应的最大速率和溶液粘度之间呈很好的线性关系,粘度一定时,从室温开始随着温度的增加,体现出良好的峰值关系。
2.由于溶液粘度的增加,荧光偏振分析法测量出来的酶浓度曲线纵坐标明显向上移动,同时偏振度减小的趋势变缓。这和DNS法酶活测量结论是一致的。酶浓度一定时溶液粘度和荧光偏振差也成正比例关系。溶液粘度和最大反应速率以及荧光偏振差比例相互关系曲线均为近似的直线,且几乎相互重叠,说明DNS法和荧光偏振法得到的结果是一致的。