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口腔种植体必需在颌骨和软组织内及口腔内双重环境中行使功能。除了要与骨组织牢固结合外,还必须在种植体软组织界面建立能够防止细菌及其它致炎因子侵入的生物屏障。软组织界面是种植体结合的较薄弱环节,对种植体软组织附着机制和种植体软组织之间生物学封闭完整性的增强因素的更进一步理解将会有助于改善功能性种植体的预后。 目前,种植体与软组织附着的确切机制尚无定论,口腔粘膜基层上皮细胞纯化培养及种植体组织界面超薄切片技术的困难是影响这项研究的两个难题。国外研究上皮细胞与钛结合时细胞的来源多取自牙周膜内马拉赛氏剩余上皮细胞,与临床实际情况相差甚远,采用钛膜技术研究细胞与钛结合的超微结构时没有论及钛膜表面特性对实验结果的影响。本实验对口腔粘膜基层上皮细胞培养、钛膜制备、上皮细胞和牙龈成纤维细胞与钛结合的超微结构及结合的改善因素进行系列研究。 实验共分四部分:第一部分,建立正常口腔粘膜基层上皮细胞培养模型,以期获得结构及功能类似体内的纯化的体外培养的口腔粘膜基层上皮细胞,并可在体外存活较长时间;第二部分,制备可用以制作超薄切片以观察细胞与钛结合超微结构的钛膜,并观察所制钛膜的表面粗糙程度,分析钛膜的元素组成及钛的价态,以用于解释后续实验结果;第三部分,采用透射电镜观察体外培养的人口腔粘膜基层上皮细胞和人牙龈成纤维细胞在钛膜表面附着的超微结构,探讨钛与这两种细胞的结合机理;第四部分,将商品化基底膜基质Matrigel涂于纯钛表面,利用角蛋白单克隆抗体和波形丝单克隆抗体免疫荧光染色技术,在落射荧光显微镜下观察口腔粘膜基层上皮细胞和成纤维细胞在其表面的附着情况,计算贴壁率,并与对照组比较,探讨Matrigel对这两种细胞的附着有无促进作用。 实验结果如下: