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东海乌参(学名:白肛海地瓜Acaudina leucoprocta),属于芋参目(Molpiadida)尻参科(Caudinidae),盛产于我国浙江沿海海域。本文以东海乌参为研究对象,从其体壁中提取分离多糖成分,采用化学和波谱学的方法对其结构进行系统分析,并对其活性进行评价,研究结果如下:东海乌参经1%KOH 60℃提取3 h后,调节pH至6.7,使用4%木瓜蛋白酶56℃酶解2.5 h最终粗多糖得率为4%。经Q Sepharose Fast Flow(QFF)阴离子交换柱层析以及Sephacryl S-200凝胶渗透柱层析纯化后得到两个多糖组分:WS-1和WS-2。理化性质分析表明WS-1组分总糖含量为59%,蛋白含量为8%,硫酸基含量为15%;WS-2组分总糖含量为54%,蛋白含量为4%,硫酸基含量为30%。单糖组成分析表明WS-1岩藻糖的含量为98%;WS-2主要由岩藻糖、糖醛酸和氨基糖组成。结合理化性质与单糖组成分析,推测WS-1为硫酸化的岩藻聚糖,WS-2为硫酸化的糖胺聚糖。经凝胶排阻色谱测定,多糖组分WS-1和WS-2的分子量分别为593 kDa和359kDa。红外光谱、甲基化分析、二糖组成分析以及核磁共振分析结果表明多糖WS-1组分是由→3)-α-L-Fucp-(1→组成的线性结构,并且在岩藻糖的二位和四位存在硫酸基修饰,其中Fuc2S4S含量为24%,Fuc2S含量为24%,Fuc4S含量为12%,Fuc0S含量为40%,平均8个岩藻糖基存在7个硫酸基修饰;多糖WS-2组分的骨架结构由→3)-β-D-GlcpNAc6S-(1→4)-β-D-GlcpUA-(1→和→3)-β-D-GlcpNAc4S6S-(1→4)-β-D–GlcpUA-(1→组成,并且这两种结构的比例为1.5:1,在糖醛酸的3位可能连有聚合度为1-6并且带有1-3个硫酸基团的岩藻寡糖,岩藻寡糖的连接方式为→3)-α-L-Fucp-(1→,岩藻糖残基有Fuc2S4S、Fuc3S4S、Fuc0S以及Fuc4S四种类型,其中Fuc3S4S在岩藻糖侧链的末端。通过测定APTT、PT和TT评价WS-1和WS-2的体外抗凝血活性,结果表明WS-1组分只能经内源性途径发挥抗凝血作用,而WS-2组分能经内源性以及外源性途径发挥抗凝血作用,并且研究发现WS-2组分还能经抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)介导,抑制凝血因子Ⅱ(FⅡa)和凝血因子Ⅹ(FⅩa)的活性。以RAW264.7巨噬细胞为靶细胞,探究多糖组分WS-1对巨噬细胞的免疫调节作用,结果表明其可提高巨噬细胞的吞噬活性并且增加ROS的产生。通过ELISA试剂盒测定WS-1对巨噬细胞分泌细胞因子的影响,结果表明其可提高细胞分泌iNOS,TNF-α,IL-6,IL-12和IL-1β的水平。进一步通过细胞膜受体拮抗实验,推测WS-1能被TLR4受体识别,从而活化巨噬细胞,调节其免疫功能。抗病毒结果显示:多糖WS-2组分具有良好的抗HSV1病毒活性,其IC50为14.79±1.10μg/mL,并且其安全指数较大(SI指数为135.23),有进一步研究的价值。本实验对东海乌参多糖进行系统的结构以及活性的研究,实验结果为东海乌参的高值化开发提供了重要参考。