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iASPP是一种新报道的肿瘤相关蛋白。目前，关于该蛋白研究最为深入的是其能够通过调控p53蛋白家族转录活性的方式抑制细胞凋亡，而iASPP还具有结合并抑制NF-κB的作用，但是关于二者相互作用所产生的生物学效应的研究却很少。另外，iASPP的细胞核定位是实现其已知功能的前提，然而其细胞内定位的调控机制仍不十分清楚。前期结果显示在细胞凋亡的早期，活化的caspase可介导iASPP剪切，提示caspase介导的剪切可能具有调控iASPP活性的作用。因此，本研究在前期实验结果的基础上，以NF-κB持续性激活的肿瘤细胞为模型，探讨caspase介导的iASPP剪切对iASPP细胞定位的调控作用，及其对NF-κB相关细胞凋亡进程的影响，并对该过程的分子机制进行了初步的研究。 首先在细胞水平上，本文通过Annexin V-FITCPI染色细胞凋亡检测、PI染色细胞周期检测以及NF-κB抑制剂处理细胞凋亡检测等方法，研究了caspase介导的iASPP剪切对细胞凋亡以及细胞周期的影响，并证明这些生物学效应是通过NF-κB途径实现的。其次本课题进一步探索了caspase介导的iASPP剪切促进细胞凋亡的调控机制。先用细胞蛋白免疫荧光实验证明caspase剪切对iASPP在细胞内定位的影响，然后通过Luciferase reporter实验研究剪切产生的iASPP对NF-κB转录活性的调控，最后用半定量RT-PCR研究iASPP片段对NF-κB下游与凋亡及增殖有关基因表达水平的影响。 结果显示全长iASPP，caspase剪切产生的iASPP-(295-828)与iASPP-(92-828)片段对细胞周期的分布均没有明显调控作用，全长iASPP以及iASPP-(92-828)片段对细胞凋亡进程也没有明显影响，然而iASPP-(295-828)却能够明显提高细胞凋亡的比例，NF-κB抑制剂BAY11-7082能够阻断其促凋亡效应，提示iASPP-(295-828)的促凋亡作用依赖于NF-κB。进一步的研究显示caspase剪切导致 iASPP由细胞质转移到细胞核。应用Luciferase reporter技术检测发现虽然iASPP全长蛋白以及不同大小片段均可抑制NF-κB转录活性，但是iASPP-(295-828)片段的抑制作用明显更强，NF-κB下游靶基因mRNA表达水平也因iASPP-(295-828)片段的表达而发生明显变化：促凋亡基因Bax表达明显降低，而凋亡抑制基因Bcl-xl和CIAP1却明显增高。 总之，本研究揭示了一种新的iASPP活性调控机制，并初步显示了该机制在调控NF-κB相关细胞凋亡信号中的作用，即iASPP被caspase剪切之后，使iASPP从细胞质转移到细胞核内，进入细胞核的iASPP片段抑制NF-κB转录活性能力增强，能更有效的调控NF-κB下游凋亡相关基因的表达。这些研究结果为理解恶性肿瘤细胞如何产生耐药性提供了一个全新视角，明确iASPP和NF-κB的作用机制为提高肿瘤细胞的化疗药物敏感性提供了理论基础，具有重要的潜在应用价值。