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杨树(PopulusL)是世界上重要的栽培树种,因其基因组较小,易于无性繁殖,现已成为林木基因工程育种的模式植物。杨树遗传转化研究已经取得了重大进展,已获得了抗除草剂、抗虫、抗病以及抗干旱的转基因杨树,但其中大部分为单基因转化植株,抗性比较单一。本研究以京2杨(Populus×euramericanacl‘J2’)和银腺杂种杨(P.alba×P.glandulosa)为研究对象,利用基因枪法对其进行vgb基因、BtCry3A+OC-I基因、API+BtCry1Ac基因、JEF33#基因和NHX基因的共转化,以期获得具有多抗性的杨树基因工程新品种。主要研究内容和实验结果如下:
1.确定了京2杨优化组培条件。其最适基本培养基为MS培养基;最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.08mg/L+IBA0.08mg/L;生根培养基中加入活性碳不利于其生长;光周期对其生长没有显著影响,但光照强度和生根培养基pH值对其生长影响显著,最适光照强度为25001ux,最适生根培养基pH值为6.5。
2.建立了京2杨叶片和叶柄的再生体系,并确定了卡那霉素选择压。最佳不定芽诱导培养基:叶片为MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,叶柄为MS+BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L;叶片和叶柄不定芽分化的卡那霉素选择压分别为40mg/L和50mg/L,不定根诱导的卡那霉素选择压为30mg/L。
3.进行了京2杨和银腺杂种杨的多基因共转化,获得京2杨抗性植株39个,银腺杂种杨抗性植株56个。对银腺杂种杨抗性植株进行PCR检测,共获得20个单基因(vgb)转化植株,3个三基因(vgb和BtCry3A+OC-I)转化植株。