目前糖尿病肾病的治疗仍然缺乏特别有效的方法。有资料证实，舒洛地特有缓解糖尿病肾损害的作用，本研究通过应用舒洛地特治疗糖尿病大鼠，观察舒洛地特对生化指标、肾组织NF-κ B和ICAM-1表达水平的影响以及对糖尿病大鼠肾脏病理的影响，探讨舒洛地特缓解糖尿病肾脏病变的作用及机制。 材料与方法： 1.动物分组与处理 雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠36只随机分为为空白对照组(C组)，糖尿病未治疗组(D组)和舒洛地特治疗组(S组)。以1﹪的链脲佐菌素(STZ)溶液，按65mg·kg<-1>腹腔注射建立糖尿病模型。S组以舒洛地特10 mg·kg<_1>·d<_1>灌胃，C组和D组给予等量生理盐水灌胃，共观察12周，期间未用口服降糖药物及胰岛素治疗，每2周测血糖及称量体重。 2.标本的收集与处理 2.1尿液的留取和检测：12周末将大鼠置洗净的金属代谢笼收集24h尿，记录尿量后取5m1，5000r/min离心5min，置于-30℃冰箱保存待测24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER)和尿肌酐。 2.2血标本的留取和检测：所有大鼠禁食12h后称量体重(Bw)，用戊巴比妥溶液40mg/kg腹腔内注射麻醉，经腹主动脉采血6ml，常温下5000r/min离心10min分离血清，将上清液保存于-30℃，待测血糖(BG)、肾功能指标(BUN、Scr、Ccr)、肝功能指标(ALT、AST、LDH、Alb、A/G)、血脂指标(Tch、TG、LDL、HDL)、血常规(Hb、RBC、WBC)及凝血指标(PT、TT、APTT)。 2.3肾组织标本的留取和检测：处死大鼠后，迅速取出双侧肾脏，速置于冻存管中于液氮中保存待测，另存部分在10﹪中性甲醛溶液中进行外固定。 3.肾组织病理及免疫组化检测 3.1 HE染色：固定后的肾组织常规HE染色，制成4 μ m厚切片，光镜下分别观察肾小球病理变化。 3.2免疫组化检测肾组织NF-κ BKICAM-1的表达：用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶染色法(SP法)按试剂盒说明书。抗原修复，DAB显色，苏木精复染，脱水，透明封片。以PBS代替一抗作为阴性对照，已知阳性切片作为阳性对照，比较每组的阳性细胞率。 4.RT-PCR检测肾组织NF-κ B及ICAM-1 mRNA的表达 4.1肾组织总RNA提取：Trizol法从肾组织提取总RNA，-70℃超低温冰箱保存备用。 4.2 RNA纯度的检测：采用紫外分光光度计以测OD260/OD280比值，检测所提取的各组RNA样品的OD260/OD280比值均介于1.7～2.0之间。 4.3 RNA完整性的检测：采用琼脂糖凝胶电泳进行RNA完整性的检测，紫外灯下观察为3条带，分别为28S、18S、5S，各条带清晰，说明提示RNA未有降解。 4.4逆转录反应：采用逆转录试剂盒，取4 μ g的各样品的总RNA，用随机引物合成cDNA。 4.5 PCR扩增：反应体系：ddH<,2>O、Ex Taq Buffer、cDNA模板、dNTP、上游primer、下游primer及ExTaq酶。反应体系总体积达50μl。反应条件：94℃×lmin变性→55℃×30s退火→72℃延长50s，共36个循环后72℃延伸10min。 4.6 PCR扩增产物检测：取5μl PCR扩增产物经1.5﹪琼脂糖凝胶电泳，以Marker为分子大小标记，在紫外检测仪上观察并照相，在图像分析系统上进行分析比较。 结果： 1.各组大鼠的一般状况正常对照组大鼠精神状态良好，无死亡；糖尿病大鼠血糖水平明显高于正常对照组、体重明显低于正常对照组。糖尿病组有3只死亡；舒洛地特组有1只死亡，糖尿病组其中1只死于灌胃误伤，余死因不详，考虑感染致多器官衰竭所致。舒洛地特组大鼠未发生出血不良反应。 2.血、尿标本的检测12周末糖尿病大鼠出现高脂血症，Tch、TG及LDL均较正常对照组明显升高、HDL明显降低；与糖尿病组比较，舒洛地特组高脂血症较轻，但仍较正常对照组高。糖尿病大鼠出现肾功能损害，BUN、Scr及Ccr均较正常对照组明显升高，舒洛地特组肾功能损害指标又较糖尿病组明显的改善。糖尿病组大鼠肝功能比正常对照组差，ALT、AST及LDH均较正常对照组明显升高、A/G明显降低，表明糖尿病模型大鼠伴有肝功能损害；与糖尿病组比较，舒洛地特组肝功能无显著性差异。舒洛地特组大鼠和糖尿病组大鼠均与正常对照组血常规无明显差异。糖尿病组大鼠凝血指标PT、TT及APTT均较正常对照组明显缩短，表明糖尿病大鼠出现了明显的高凝状态；而舒洛地特组大鼠凝血指标较糖尿病组明显延长，而与正常对照组比较无显著性差异。说明舒洛地特能明显地改善糖尿病大鼠血液的高凝状态。 3.肾组织病理及免疫组化结果光镜下正常对照组大鼠肾小球和肾小管无异常。糖尿病组大鼠肾小球肥大，肾小管空泡变性、扩张，肾小球基底膜普遍增厚，系膜基质大量增加，肾小动脉增厚伴玻璃样变甚至闭塞，提示糖尿病组出现糖尿病肾脏损害病理改变。舒洛地特组大鼠肾组织病理改变有不同程度的改善，肾小球体积稍有增加，未见有肾小管空泡样变，肾小球毛细血管基底膜轻度增厚及系膜基质轻度增多，肾小动脉壁轻度增厚未见玻璃样变，毛细血管管腔变窄不明显。肾组织免疫组化结果显示，在正常对照组大鼠肾组织中NF-κB及ICAM-1均有一定的表达，但糖尿病组大鼠肾组织中二者的表达明显高于正常对照组，舒洛地特治疗组二者的表达显著低于糖尿病组，但与对照组相比仍明显增高。 4.肾组织NF-κB与ICAM-lmRNA的表达RT-PCR结果显示，正常组大鼠肾组织NF-κB与ICAM-lmRNA的表达很低；与正常组相比，糖尿病组、舒洛地特治疗组大鼠肾组织NF-κB与ICAM-lmRNA表达显著升高；与糖尿病组比较，舒洛地特治疗组大鼠。肾组织NF-κB与ICAM-lmRNA表达水平明显降低，但与对照组相比仍较高。 5.相关性分析相关分析显示，大鼠肾组织中NF-κB、ICAM-1的表达与肾功能指数、UAER呈显著正相关。 结论：糖尿病大鼠肾组织NF-κB和ICAM-1的表达水平明显升高。肾功能生化指标和尿蛋白的变化与NF-κ B和ICAM-1表达水平的改变呈正相关。舒洛地特能够下调糖尿病大鼠肾功能生化指标和尿蛋白以及肾脏NF-κ B、ICAM-1的表达。舒洛地特减轻糖尿病大鼠肾脏损害的机制可能与其抑制NF-κ B和ICAM-1的表达有关。