目的：良性前列腺增生症（BPH）是中老年男性泌尿外科的常见疾病。前列腺是由腺泡和间质两部分组成的异质性器官。BPH是一种一间质增生为主的疾病，在间质增生中间质与上皮之间的比例较正常组织有显著的升高。近年的研究表明，雌激素在间质增生的过程中发挥了重要的作用。　　 雌激素作为一种重要的固醇类性激素，广泛参与了细胞的增殖、分化、凋亡等过程。有报道称雌激素在前列腺间质细胞中可以参与增殖和分化的调节过程，但其作用的分子机制尚未完全阐明。本文旨在通过分子生物学和细胞生物学手段，研究雌激素在前列腺间质细胞中参与调节细胞增殖和平滑肌表型增加的分子机制，阐明雌激素在BPH发生发展过程中可能的作用，为临床治疗提供新的实验依据。　　 方法第一部分：用原代培养的人前列腺间质细胞和人正常前列腺间质细胞系WPMY-1作为实验材料，添加雌二醇（E2）和BSA-E2刺激细胞，用MTT法和细胞计数法检测细胞增殖，用Real-time RT-PCR和Western blot法检测细胞增殖核抗原（PCNA）的基因和蛋白水平；用Western blot法检测雌激素对于细胞MAPK途径重要激酶ERK1/2的激活情况；用PD98059选择性阻断MAPK途径的激活，用MTT法和细胞计数法检测雌激素刺激后的细胞增殖情况；使用Real-time RT-PCR方法检测间质细胞中雌激素受体表达情况，构建ERα和GPR30的shRNA质粒，检测雌激素通过哪种类型受体实现了快速激活MAPK途径以及促增殖的作用。　　 第二部分：用原代培养的人前列腺间质细胞作为实验材料，添加E2和BSA-E2刺激细胞，用Real-time RT-PCR检测平滑肌特异基因smoothelin、SM2/SM1的基因表达水平，以Western blot法检测SM-MHC的蛋白水平；用Real-time RT-PCR和双抗体夹心ELISA法检测TGF-β1的基因和蛋白水平；分别用PD98059、ICI182，780和TGF-β1中和抗体，研究雌激素促进间质细胞平滑肌表型增加的信号通路。　　 第三部分：在HEK293细胞中，用重组腺病毒技术包装含有平滑肌特异基因SM22启动子调控的红色荧光蛋白（RFP）和CMV启动子调控的绿色荧光蛋白（GFP）的重组腺病毒；用重组腺病毒感染原代培养的前列腺间质细胞，通过观察组成型表达的GFP确定转染效率，并通过感染平滑肌选择性培养液和普通培养液富集的间质细胞中RFP的表达情况确定启动子的特异性；使用流式细胞术分离RFP+/GFP+的平滑肌细胞和RFP-/GFP+的成纤维细胞，用基因芯片的方法对其进行表达谱分析；用腺病毒感染结合流式细胞术检测雌激素调节间质细胞平滑肌表型的作用。　　 结果第一部分：E2和BSA-E2均能够促进前列腺间质细胞的增殖，MAPK信号通路的选择性抑制剂PD98059可有效阻断这一过程。Western blot结果显示，雌激素可以快速激活细胞内MAPK信号通路，引起ERK的磷酸化过程。前列腺间质细胞中表达ERα和GPR30，而不表达ERβ。用ERα和GPR30的shRNA质粒，阐明了雌激素通过细胞膜上的ERα快速激活MAPK途径，进而促进前列腺间质细胞的增殖。　　 第二部分：E2和BSA-E2均能够明显的促进前列腺间质细胞的平滑肌细胞表型；E2和BSA-E2均能够通过快速激活MAPK途径促进间质细胞中TGF-β1的表达；用PD98059、ICI182，780和TGF-β1中和抗体与雌激素共同作用于细胞，PD98059和TGF-β1中和抗体均能够部分阻断E2促进平滑肌表型的作用，能够完全阻断BSA-E2促进平滑肌细胞表型的作用：ICI182，780能够部分阻断E2促进平滑肌表型的作用，而对于BSA-E2引起平滑肌表型的增加，则无明显的抑制效果，ICI182，780对于雌激素引起的MAPK途径激活亦无明显作用；联合使用PD98059和ICI182，780或TGF-β1中和抗体和ICI182，780均能够阻断E2促进平滑肌细胞表型的作用。　　 第三部分：成功构建并包装了含有平滑肌特异基因SM22启动子调控的RFP和CMV启动子调控的GFP的双荧光重组腺病毒，并在原代间质细胞中获得了极高的感染效率和特异性；使用流式细胞术体外分离经过感染的原代培养的间质细胞，对RFP+/GFP+细胞和RFP-/GFP+细胞使用基因芯片手段进行了表达谱分析；用流式细胞术结合腺病毒感染的方法研究了雌激素促平滑肌细胞表型的作用，获得了与第二部分一致的结果。　　 结论1.在前列腺间质细胞中，雌激素通过细胞膜上的ERα快速激活MAPK信号通路，促进前列腺间质细胞的增殖。　　 2.在前列腺间质细胞中，雌激素通过基因组效应和非基因组效应促进前列腺间质细胞平滑肌细胞的表型。