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本研究对三头种公牛的精液进行了分离、冷冻和体外受精试验。本研究对比了三头荷斯坦种公牛的精子分离效果，并采用荧光染色法，对常规冻精和分离冻精的精子活率、顶体完整率和线粒体活性进行检测，来评价流式细胞仪分离处理对不同种公牛精子生理机能的影响，研究应用不同种公牛常规冻精和分离冻精的体外受精效果和胚胎发育能力。试验结果表明，不同种公牛个体间除分离准确率外，精子的分离速率和死精率都存在显著差异(3.7vs4.5vs3.1，9.6 vs 7.7 vs 14.7，P<0.05)。分离和冷冻处理不同程度地降低了每头种公牛精子的存活能力、活率、顶体完整率和线粒体活性，无明显差异(P>0.05)。此外，1号与3号种公牛的精子活率和顶体完整率在分离冷冻后则差异显著(精子活率：1号种公牛28.2 vs 3号种公牛46.3，顶体完整率：1号种公牛32.2 vs3号种公牛53.3，P<0.05)，而2号种公牛和3号种公牛间没有显著差异(P>0.05)。上述结果表明，流式细胞仪分离和冷冻处理对牛精子存活能力、活率、顶体完整率和线粒体活性与常规冻精相比造成明显伤害，但分离后的精子可用于受精使用。不同种公牛个体间精子的分离速率、死精率、以及对分离和冷冻处理的耐受性存在显著差异。利用不同种公牛的常规冻精和分离冻精进行体外受精试验，试验结果表明利用不同种公牛分离冻精进行受精，受精后的原核形成率、卵裂率(35.7vs67.2vs58.1，31.9vs 60.6vs53.1，P<0.05)存在显著差异，但是囊胚细胞数则没有差别(P>0.05)。1号种公牛分离冻精组的囊胚发育率显著低于2种公牛(15.4vs24.0，P<0.05)，与3号种公牛差异不显著(P>0.05)。试验结果说明不同种公牛分离冻精能够使成熟牛卵母细胞受精并支持其发育到囊胚阶段，但是由于在分离、冷冻、解冻过程中不同种公牛精子对其耐受能力的不同，造成其解冻后存活能力和生理功能指标不同程度的下降，从而影响其受精效率，并在种公牛个体间表现出显著差异。选择适宜的种公牛，对于提高精子的分离效率和分离精液的品质都有着重要的意义。