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目的:观察黄芪多糖(Astragalus Polysacharin,APS)对高脂血症大鼠的治疗效果,从miR-128-3p/NRF2/抗氧化通路介导的脂质代谢途径探讨黄芪多糖治疗高脂血症的分子机制。方法:1.动物实验将SD大鼠随机分为正常组、疾病模型组、辛伐他汀组和APS组。正常组大鼠喂食基础饲料,其它3组大鼠喂食高脂饲料8周。建模成功后,APS组和辛伐他汀组分别以700mg/kg和6.7 mg/kg的浓度灌胃8周,正常组和疾病模型组灌胃等量的生理盐水。实验期间,记录实验大鼠饮水量、饮食量、摄能量、排泄量和体重等日常指标,每4周采集一次血清标本,检测血糖、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和丙二醇(MDA)含量以及谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、淀粉酶(AMS)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性。实验结束后,处死大鼠,摘取大鼠的胰腺和肝脏组织。对实验大鼠的胰腺组织进行切片,利用HE染色观察胰岛和腺泡形态;利用免疫组化染色观察胰岛β细胞数量和功能。对实验大鼠肝组织进行切片,利用HE染色观察肝组织细胞形态和脂肪沉积,并进行肝组织脂肪变性分级;同时,测定实验大鼠肝组织中TC和TG含量,计算肝脾重指数。此外,利用RT-q PCR技术检测肝组织中miR-128-3p的表达,利用Western Blot方法检测肝组织中miR-128-3p靶基因NRF2的表达。2.肝细胞实验采用油酸(OA)和棕榈酸(PA)以2:1浓度构建高脂血症大鼠肝细胞(BRL)和人肝癌细胞(Hep G2)模型。利用CCK-8法确定APS对两种细胞作用的最适药物浓度和时间。利用最适的药物浓度和时间处理两种细胞模型,分别测定APS处理组和对照组细胞内TC、TG、MDA和T-SOD水,以及miR-128-3p和NRF2的表达。结果:1.动物实验(1)APS对高脂血症大鼠日常和血脂指标的动态观察高脂饮食8周后,模型组大鼠的能量摄入、体重、血脂水平显著高于正常组(p<0.05),而饮食量、饮水量和排泄量则较正常组低(p<0.05);药物干预4周后,辛伐他汀组大鼠TC、TG和LDL-C含量较疾病模型组大鼠显著下降(p<0.05),APS组血脂水平无明显变化;药物干预8周后,APS和辛伐他汀组大鼠饮水量、排泄量、体重和血脂水平较疾病模型组大鼠明显改善(p<0.05)。(2)APS对高脂血症大鼠胰腺组织病理改变的影响APS能显著降低高脂血症大鼠的血糖和AMS水平,然而辛伐他汀组没有明显改善。HE染色显示,相对正常组,疾病模型组和辛伐他汀组大鼠胰岛形态改变,边界不规则,胰岛内的血管管腔扩张,且胰岛内的细胞有炎细胞的浸润;APS组大鼠胰岛和腺泡细胞在细胞排列和弥漫性水肿等方面呈不同程度的改善。免疫组化显示,相对正常组,疾病模型组和辛伐他汀组大鼠胰岛细胞排列不规则,多有破损,有较大间隙;APS组胰岛β细胞胞质内胰岛素颗粒着色深,分布较集中,呈现不同程度改善。(3)APS对高脂血症大鼠肝组织病理改变的影响APS能降低高脂血症大鼠转氨酶活性(p<0.05),然而辛伐他汀组没有明显改善。形态观察发现,高脂饮食8周后,疾病模型组肝脏重量增加,边缘圆钝,表面呈白色糜烂状,属典型的肝细胞脂肪变性。药物治疗后,辛伐他汀和APS组大鼠血脂水平、肝脏组织中的TC和TG含量、肝脏指数、以及肝细胞内脂滴数目和面积显著降低。但仅APS能改善大鼠转氨酶水平。(4)APS对高脂血症大鼠肝脏组织miR-128-3p和NRF2表达的影响APS能显著降低模型大鼠血清MDA含量,增加T-SOD活性。miRNA检测结果显示,与正常组比,疾病模型组大鼠血清和肝组织中miR-128-3p的表达显著上调,而APS则能明显改善这一结果。蛋白表达结果显示,疾病模型组大鼠肝组织NRF2蛋白比正常组大鼠显著下降,而APS组大鼠肝组织中NRF2蛋白比模型组大鼠显著上升。2.肝细胞实验CCK-8实验结果显示,BRL和Hep G2细胞最适的黄芪多糖药物浓度是150 ug/ml,最适的处理时间是24h。在高脂诱导的BRL和Hep G2细胞模型中,两种细胞内TC、TG和MDA含量,以及miR-128-3p表达显著增加(p<0.05),而T-SOD活性和NRF2蛋白表达则显著降低。给予APS干预后,两种细胞模型的TC、TG和MDA含量,以及miR-128-3p表达显著下降,同时T-SOD活性和NRF2蛋白表达则显著上升(p<0.05)。结论:APS能显著降低高脂血症模型大鼠血糖和血脂水平,其机制可能是一方面通过改善模型大鼠胰腺组织胰岛和腺泡细胞的病理病变,恢复胰腺功能改善糖脂代谢;另一方面通过抑制模型大鼠肝组织miR-128-3p的高表达,增加肝组织NRF2蛋白表达,降低MDA含量,增加T-SOD活性,提高肝组织的抗氧化能力,从而改善肝组织的脂肪沉积和脂肪变性,调节机体脂质代谢水平,最终达到治疗高脂血症的目的。