单核细胞趋化因子-1(MCP-1)是一种一般表达于白细胞的趋化蛋白,在正常神经组织内极少表达,近来研究发现此类细胞因子在神经损伤后表达增加。以往实验证实MCP-1在慢性压迫背根神经节疼痛模型(CCD)上表达增多,并且MCP-1能够引起DRG细胞去极化,提示MCP-1/CCR2信号系统可能参与神经病理性疼痛痛觉过敏的形成,但其机制尚不十分清楚。本课题在慢性压迫背根神经节的模型上,首先使用免疫荧光染色的技术明确CCD术后CCR2受体的表达及分布,在此基础上,使用行为学测试的方法观察MCP-1对CCD大鼠痛觉行为的作用,并使用电生理技术探讨了MCP-1可能通过易化P2X3受体功能起作用。主要实验结果如下： 1.行为学测试结果显示MCP-1能够引起CCD大鼠的自发痛觉行为。表现为注射MCP-1后,大鼠自发抬腿次数以及时间增加,并且对机械刺激有反应的阈值降低。 2.免疫荧光染色显示CCD神经元上MCP-1主要的受体CCR2表达增加。细胞内游离钙离子测定表明,MCP-1的能够引起细胞内钙离子增加,说明在急性分离的CCD神经元上表达的CCR2具有功能。 3.使用全细胞膜片钳的方法检测CCD神经元静息膜电位平均-52.85±5.24mV,对照组(假手术组)静息膜电位平均55.46±0.80mV,细胞内记录CCD神经元阈电流为304.29±38.52pA,正常对照组神经为464.71±66.14pA。提示CCD术后,DRG神经元兴奋性增强。此外MCP-1的能够降低CCD的神经元的阈电流水平。这些结果表明,CCD神经元兴奋性增高可能是由于MCP-1/CCR2信号系统的上调所致。 4.免疫组织化学显示,CCR2与P2X3受体在某些DRG神经元上共存。全细胞膜片钳记录结果显示,P2X3受体激动剂α,β,me-ATP可诱发一大的内向电流,预给药MCP-1 1min可显著增强α,β,me-ATP诱发的电流强度；使用共聚焦显微镜活细胞内钙离子测定,MCP-1增强α,β,me-ATP诱发的细胞内钙荧光强度；行为学测试结果显示,MCP-1增强α,β,me-ATP诱发的自发性痛觉反应,并且与注射对照药物组大鼠相比MCP-1注射组α,β-meATP引起的大鼠机械痛阈值下降幅度更加明显。这些结果提示:MCP-1还可能通过易化P2X3受体功能参与CCD术后痛觉过敏的病理形成。 综上所述,通过研究MCP-1/CCR2信号系统在神经病理性疼痛中的作用,证明在CCD模型上MCP-1/CCR2信号系统是引起痛觉过敏的重要原因之一,它能够通过增强神经元兴奋性以及易化易化DRG神经元上P2X3受体功能参与CCD术后的痛觉过敏病理过程。