日本脑炎病原检测与免疫防治方法的研究

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:neverneverland
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
日本脑炎(Japanese encephalitis, JE)是由日本脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus, JEV)引起的中枢神经系统的急性传染病。本病在世界许多国家广泛存在,不但对养猪业造成了巨大的经济损失,而且严重威胁着人类的健康。JE的诊断可以通过临床检测结合流行病学进行,确诊需要实验室血清学检测和病原学检测。目前,乙脑的治疗没有有效的方法,只有进行疫苗接种结合灭蚊工作进行。本实验从乙脑的检测和防治方面做了以下研究。一、日本脑炎病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用本实验分别以JEV保守的prM,NS1及E基因片段为模板设计三对引物,筛选基于SYBR Green Ⅰ模式的实时荧光PCR的最佳引物,以建立快速、准确检测日本脑炎病毒的实时荧光PCR方法。以测序正确的阳性质粒为标准品建立标准曲线,并方法的敏感性、特异性、可重复性进行评价。结果表明,以E蛋白核苷酸序列957-1431bp区域作为模板设计的引物,灵敏度较其他两个高,该方法只从JEV阳性样本检出扩增信号,不与其它病原出现交叉反应;熔解温度为86.2±0.5℃,扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体;在1×103~1×109拷贝之间呈现良好的线性关系,相关系数为0.999,扩增效率94.2%,最低可检测1000拷贝以下反应阳性标准品,比常规PCR敏感至少103倍;组内变异系数、组间变异系数分别为0.53%~1.42%、1.16%。对16例猪乙脑临床疑似病料进行检测,阳性率为81.25%(13/16),阳性样品扩增片段大小为475bp,与预期大小相当。本研究建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR特异性强、灵敏度高、检测迅速,为JEV的快速检测、分子流行病学调查提供新方法。二、一株猪源日本脑炎灭活疫苗配伍不同的佐剂在小鼠体内的免疫特性研究为了评价发展一种有效的由VerO细胞增殖的猪源日本脑炎疫苗,本研究以一株从蚊体中分离得到的猪源日本脑炎病毒NJ2008株作为灭活疫苗研究用种毒,经BHK细胞增殖后病毒效价可达108.67TCID50/mL。将病毒接种于长满Vero细胞的转瓶上培养,收集病毒液,经纯化、浓缩后以0.2%的福尔马林灭活,病毒经福尔马林灭活后分别与Montanide ISA15AVG白油佐剂、铝胶佐剂、弗氏不完全佐剂(F1人)和蜂胶佐剂配伍制成灭活疫苗。4-6周龄的BALB/c小鼠(均为雌性),随机分为6组,每组12只,前四组进行不同佐剂的灭活疫苗的免疫,第五、六组分别为弱毒疫苗SA14-14-2和PBS对照组,进行小鼠体内的免疫特性比较,并做攻毒保护实验。结果表明,配伍白油ISA15AVG佐剂的乙脑灭活疫苗表现突出,它不仅刺激产生的抗体应答水平最快、最高,而且可以同时诱导机体产生体液免疫和细胞免疫,对致死量乙脑强毒的抗攻击能力与弱毒疫苗相当,为预防治疗乙脑又提供了一个新型选择。
其他文献
猪圆环病毒(porcine circovirus, PCV)有2种基因型,分别为PCV1和PCV2,其中PCV1不致病,可以长期感染PK-15细胞,早期被认为是一种细胞污染物。而PCV2是引起断奶仔猪多系统衰竭
《五体清文鉴》是清朝官方编修的语义分类辞书。由于清代满族和蒙古族的语言接触及该辞书体类特点,其满语词汇收录了较多的蒙古语词语,这些词语在语音及结构方面均有自己的特
肝纤维化(Hepatic fibrosis)是许多慢性肝病的共同病理基础,多种细胞因子、生长因子、基质及其降解酶类等均参与了肝纤维化的发生与发展。我国肝纤维化发病率越来越高,严重地威胁着宠物和人的健康。有研究证实,肝纤维化是一个可逆的病理过程,如果能在肝纤维化发病早期进行适当有效的治疗不仅能够阻止病情的恶化,甚至还可以逆转肝脏纤维化。因此寻求防治肝纤维化的有效药物具有重大的意义。枸杞多糖(Lyci
马流感是由马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)引起马属动物的一种急性呼吸性传染病,具有国际传播性、高度传染性、发病频率高、发病率不稳定和死亡率低等特点。随着北
目的:脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON),又名呕吐毒素(vomitoxin),是由镰刀菌属病原真菌产生的真菌毒素之一。DON广泛污染谷类及其制品,严重威胁人和动物的健康。研究
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPs)可以引起以纤维素性浆膜炎、关节炎以及脑膜脑炎等为主要病变的革拉斯氏病(Glasser’s disease)。HPs的血清型普遍被视为判断其毒力
随着奶牛业的不断发展和产奶量的不断提高,奶牛真胃变位的发生率也在逐年上升,给奶牛业生产造成很大的损失。真胃变位包括真胃左方变位和真胃右方变位,此病主要发生在饲喂高
本研究旨在阐明牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠免疫细胞凋亡的影响及其影响机理。采用二苯胺法检测了给药后小鼠不同免疫细胞的凋亡百分率,结果显示:低剂量TCDCA能够显著抑制正
月儿弯弯照九州,几家欢乐几家愁。每年高考前选择专业和填报志愿时,由于专业名目繁多,尤其是一些新兴和热门的专业,广大考生和家长不知所云,缺乏对其的基本认知,从而影响了他
介绍一种利用宏指令拓展机床数控系统插补功能的方法.该方法可大大降低两坐标联动数控机床加工非圆曲线工件廓形时的编程和调试程序的工作量,提高数控加工的质量和效率. This p