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第一部分：新型小鼠睑板腺器官型培养模型的构建
目的：睑板腺对于维持眼表的完整性和健康至关重要。在本部分研究中，我们探索了小鼠睑板腺器官型培养的方法，并研究了血清和阿奇霉素对睑板腺上皮细胞分化的影响。
方法：通过显微解剖，我们从小鼠眼睑内分离出睑板组织，并采用不同培养方法将外植体于体外环境中培养24至120小时不等；同时我们将睑板组织通过酶消化和再解剖，解离得到原代睑板腺上皮细胞。将原代上皮细胞和外植体分别在无血清、含血清及血清联合阿奇霉素的培养基中孵育48小时后，我们利用MTT法，苏木精—伊红(Hematoxylin-Eosin, H&E)染色，免疫荧光染色和蛋白质印迹法(Western Blot, WB)等方法对组织活性、形态、生物标志物表达以及脂质积累进行了检测。
结果：我们发现，通过将睑板腺外植体种植于基质胶上并立即添加培养基，外植体可以保持较强的组织活性，形态，脂质积累能力及角蛋白(Keratin, Krt)14、Krt6、Krt1等生物标志物的表达水平，且组织活性可以维持至培养后72小时。在含血清及血清联合阿奇霉素的培养基中培养的原代上皮细胞和外植体内，我们均检测到了腺泡细胞脂质积累的增加和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PeroxisomeProliferators-ActivatedReceptorγ,PPARγ)表达的升高。
结论：我们成功建立了一种新型的小鼠睑板腺器官型培养模型，血清和阿奇霉素可以在离体环境促进该模型中腺泡细胞的分化与成熟。这一体外模型可同时模拟在体睑板腺腺泡与导管的代谢与功能，并有望广泛应用于睑板腺生理病理学的机制研究。
第二部分：炎症诱导小鼠睑板腺功能障碍病理机制的研究
目的：睑板腺功能障碍(Meibomian Gland Dysfunction, MGD)主要由导管阻塞引起，被认为是干眼病的主要原因。本部分研究中，我们利用新建立的小鼠睑板腺体外培养模型，对炎症在MGD发生发展过程中的作用进行了研究。
方法：将小鼠睑板腺原代上皮细胞和外植体分别在含有白细胞介素(Interleukin, IL)-1β，IL-17或相应溶剂的分化培养基中孵育48小时后，我们通过MTT法和逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(QuantitativeReverseTranscription-PolymeraseChain
Reaction,RT-qPCR)分析了细胞和外植体的活性及炎症因子的表达。此外，我们还利用免疫荧光染色、RT-qPCR和WesternBlot等方法对细胞和外植体内脂质积累水平及角质化程度进行了检测。
结果：IL-1β和IL-17的干预对小鼠睑板腺原代上皮细胞和外植体活性无明显影响，但细胞和外植体内IL-6、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor, TNF)-α及基质金属蛋白酶(Matrix Metalloprotein, MMP)-9的表达均明显升高。在上述两种因子的干预下,我们在细胞和外植体内均检测到了腺泡细胞脂质积累的减少及PPARγ表达的下降。此外，IL-1β和IL-17还诱导了外植体内兜甲蛋白和Krt1表达的增加，并促进了导管上皮细胞的角质化。
结论：促炎细胞因子IL-1β和IL-17可以在离体环境抑制睑板腺腺泡细胞的脂质积累，并促进导管细胞的角质化，提示炎症可通过抑制脂质合成和诱导过度角质化参与MGD的发生发展。这一器官型培养模型可用于未来MGD病理机制的研究。
目的：睑板腺对于维持眼表的完整性和健康至关重要。在本部分研究中，我们探索了小鼠睑板腺器官型培养的方法，并研究了血清和阿奇霉素对睑板腺上皮细胞分化的影响。
方法：通过显微解剖，我们从小鼠眼睑内分离出睑板组织，并采用不同培养方法将外植体于体外环境中培养24至120小时不等；同时我们将睑板组织通过酶消化和再解剖，解离得到原代睑板腺上皮细胞。将原代上皮细胞和外植体分别在无血清、含血清及血清联合阿奇霉素的培养基中孵育48小时后，我们利用MTT法，苏木精—伊红(Hematoxylin-Eosin, H&E)染色，免疫荧光染色和蛋白质印迹法(Western Blot, WB)等方法对组织活性、形态、生物标志物表达以及脂质积累进行了检测。
结果：我们发现，通过将睑板腺外植体种植于基质胶上并立即添加培养基，外植体可以保持较强的组织活性，形态，脂质积累能力及角蛋白(Keratin, Krt)14、Krt6、Krt1等生物标志物的表达水平，且组织活性可以维持至培养后72小时。在含血清及血清联合阿奇霉素的培养基中培养的原代上皮细胞和外植体内，我们均检测到了腺泡细胞脂质积累的增加和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PeroxisomeProliferators-ActivatedReceptorγ,PPARγ)表达的升高。
结论：我们成功建立了一种新型的小鼠睑板腺器官型培养模型，血清和阿奇霉素可以在离体环境促进该模型中腺泡细胞的分化与成熟。这一体外模型可同时模拟在体睑板腺腺泡与导管的代谢与功能，并有望广泛应用于睑板腺生理病理学的机制研究。
第二部分：炎症诱导小鼠睑板腺功能障碍病理机制的研究
目的：睑板腺功能障碍(Meibomian Gland Dysfunction, MGD)主要由导管阻塞引起，被认为是干眼病的主要原因。本部分研究中，我们利用新建立的小鼠睑板腺体外培养模型，对炎症在MGD发生发展过程中的作用进行了研究。
方法：将小鼠睑板腺原代上皮细胞和外植体分别在含有白细胞介素(Interleukin, IL)-1β，IL-17或相应溶剂的分化培养基中孵育48小时后，我们通过MTT法和逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(QuantitativeReverseTranscription-PolymeraseChain
Reaction,RT-qPCR)分析了细胞和外植体的活性及炎症因子的表达。此外，我们还利用免疫荧光染色、RT-qPCR和WesternBlot等方法对细胞和外植体内脂质积累水平及角质化程度进行了检测。
结果：IL-1β和IL-17的干预对小鼠睑板腺原代上皮细胞和外植体活性无明显影响，但细胞和外植体内IL-6、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor, TNF)-α及基质金属蛋白酶(Matrix Metalloprotein, MMP)-9的表达均明显升高。在上述两种因子的干预下,我们在细胞和外植体内均检测到了腺泡细胞脂质积累的减少及PPARγ表达的下降。此外，IL-1β和IL-17还诱导了外植体内兜甲蛋白和Krt1表达的增加，并促进了导管上皮细胞的角质化。
结论：促炎细胞因子IL-1β和IL-17可以在离体环境抑制睑板腺腺泡细胞的脂质积累，并促进导管细胞的角质化，提示炎症可通过抑制脂质合成和诱导过度角质化参与MGD的发生发展。这一器官型培养模型可用于未来MGD病理机制的研究。