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氟喹诺酮类药物因其广谱抗菌活性和较好的组织渗透性,广泛应用于系统性感染,尤其是用于治疗呼吸系统和泌尿系统感染。FQs的毒性在临床上存在中枢神经系统不良反应、胃肠道毒性、光敏反应、软骨毒性及肾脏毒性等。该类药物产生的许多毒性都与氧化应激具有一定的关系。肾毒性是FQs引起的潜在的、严重的毒性,但是肾毒性是否也与氧化应激有关还不是很清楚。本试验选择猪近端肾小管上皮细胞(LLC-PK1)为研究模型,研究了动物专用FQs达氟沙星诱导肾损伤的机制,为临床合理使用FQs并降低其引起的中毒性肾损伤提供一定的指导意义。通过细胞形态学观察,细胞增殖抑制检测,凋亡率检测,初步研究达氟沙星对LLC-PK1细胞的毒作用。然后通过检测细胞内活性氧ROS、脂质过氧化物MDA,抗氧化酶SOD、CAT及GSH-PX的影响来探究达氟沙星对LLC-PK1细胞氧化还原系统的影响。另外,通过抗氧化剂GSH和NAC的预孵育作用,检测抗氧化剂对达氟沙星诱导的LLC-PK1细胞毒性的保护作用。结果显示,达氟沙星呈时间和剂量依赖性诱发体外培养的LLC-PK1细胞增值抑制,但是只有400μM孵育48h才对细胞产生较大程度的凋亡,凋亡率为22.7%,其余的都在5%以下。另外,达氟沙星作用24h后,细胞内ROS呈浓度依赖性增加。12.5gM达氟沙星孵育细胞6h、12h、24h、48h、72h,24h细胞内ROS达到最大值。400μM达氟沙星孵育细胞24h后,细胞内MDA的含量是对照组的4.1倍,但是并不引起细胞凋亡。另外,25μ.M达氟沙星孵育细胞24h后,抗氧化酶SOD和CAT的酶活性降低,但是100、200、400μM达氟沙星孵育24h后,SOD和CAT的酶活性显著增高。经达氟沙星处理后,LLC-PK1细胞内的GSH-PX酶活性呈浓度依赖性降低。在抗氧化剂保护作用实验中,抗氧化剂GSH和NAC对达氟沙星诱导细胞内ROS、MDA的增加,GSH-PX酶活性的降低都具有改善作用。以上数据表明,达氟沙星引起的中毒性肾损伤机制与过量ROS积聚造成的氧化应激有关,而抗氧化酶SOD和CAT的活化,一定程度上降低了达氟沙星所诱导氧化损伤。