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黄曲霉毒素(Aflatoxins, AFs)是黄曲霉(Asperillus flavus)和寄生曲霉(Asperillus parasiticus)的二次代谢产物,广泛存在于包括谷物、油饼、干果、苹果汁、酒糟和经动物动物饮料污染的肉制品的食物和经饲养的商品中。在所有的黄曲霉毒素中黄曲霉毒素B1有很高的致畸因子,诱变因素及致肝癌物。国际癌症研究署(IACR)已将黄曲霉毒素B1(AFB1)定为人类Ⅰ类致癌物质,对于肝癌有较高的发病率。因此应建立快速、准确的检测技术,以避免黄曲霉毒素B1经食物链传播而威胁人类的健康。首先,本实验以黄曲霉毒素B1与牛血清白蛋白(BSA)和大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)偶联物分别作为免疫抗原和检测抗原,采用常规免疫方法免疫Balb/C小鼠。将经过三次免疫后血清效价达到1:243000以上的免疫后小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合、筛选和克隆,获得1株能够稳定分泌抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为3H6,其亚类鉴定重链为IgG2b,轻链为λ,染色体平均计数为90±10对。间接ELISA检测该株系培养上清的效价为1:12800,纯化腹水效价为1:106。其次,优化检测条件后,确定最佳抗原包被反应浓度为1.0μg·mL-1,最佳抗原包被条件为4℃过夜,一抗和酶标二抗IgG-HRP最佳工作浓度为1:200000和1:5000,在此条件下,建立了标准曲线,线性回归方程为y = -16.547x + 83.403,相关系数为R2=0.9871,校正曲线的线性范围为0.001～5ng/mL,最低检出浓度是0.001ng/mL。与黄曲霉毒素B1(AFB1)及其结构类似物黄曲霉毒素M1(AFM1)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的反应率分别为100%、1.4%、<1%。因此本试验所制备的抗黄曲霉毒素B1单克隆体具有良好的特异性。最后,从已筛选到的单克隆抗体杂交瘤细胞株中提取RNA,经RT-PCR扩增抗体重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,人工合成一条寡核甘酸序列即linker,将VH与VL相连接,构建成单链抗体基因,然后克隆到载体上pCANTAB-5E,转化大肠杆菌TG1,获得单链抗体噬菌体文库并利用噬菌体展示技术对抗体库进行了4轮淘选,获得具高亲和力的抗黄曲霉毒素B1的单链抗体,命名为2A5和3B6,为基因工程抗体奠定了基础。