干扰素α-2b蛋白的制备与纯化

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干扰素(IFNs)是宿主细胞在受到病原体例如病毒、微生物、寄生虫、肿瘤细胞的侵染后产生并释放的。干扰素属于糖蛋白的一种,具有干扰病毒在宿主体内复制的能力,它对于提高宿主免疫系统对病毒的识别和抵抗起到十分重要的作用,现在被广泛的运用在病毒引起的疾病和肿瘤的治疗中。本实验中的研究对象是干扰素α-2b,它属于干扰素α,同样具有抗病毒、抗肿瘤等作用。现代已经广泛的应用于肿瘤和癌症的治疗中。但是天然态的干扰素α-2b产量稀少,这样就使得需要这种药物治疗的病人承受巨大的经济负担,那么提高干扰素蛋白的产量就是摆在现在科研人员面前的一道难题。运用重组DNA技术,人们已经可以用E coli表达系统高效表达干扰素α-2b基因,干扰素α-2b蛋白以包涵体的形式存在,这样就需要将包涵体蛋白变性、复性来得到具有生物活性的干扰素α-2b,然而这一步中极易形成聚集体和错误折叠,这个问题已经是影响干扰素大量生产的瓶颈问题。本文通过以下途径来讨论解决提高干扰素蛋白产量的问题:1.脱氧胆酸钠促进了包涵体蛋白提取,使得产量提高了近25%;2.优化变性、复性的条件以及方法使杂质蛋白和二聚体的量显著减少;3.对离子交换层析条件、方法的优化使得一步离子交换就可以分离出二聚体和单体干扰素α-2b,提高了分离的效率简化了分离步骤。通过对以上方法的综合改良使得1L的复性液可以得到145-160mg正确折叠的干扰素2b蛋白。
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