基于量子点的电化学生物传感器的研制及在肿瘤标志物检测中的应用

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肿瘤是严重威胁人类健康的疾病。肿瘤标志物在肿瘤的现代临床诊断中是不可或缺的。近年来,在肿瘤标志物的诊断领域出现了多种分析方法和检测传感器。为了研制便携的检测设备,世界范围内的科研工作者在此方面做了大量的工作。虽然这些方法有不少优点,但是开发新型的、选择性和灵敏度高的临床分析方法来满足现代医疗诊断和生物医学研究的需求还是一项极具挑战性的工作。本论文研制了一种基于CdS量子点的新型的电化学生物传感器,其中还包括巯基二茂铁标记的纳米金粒子的使用,并且将此种传感器应用在了几种肿瘤标志物的分析检测当中。本论文的主要内容包括以下三个部分:1基于生物条码的概念设计了一种非酶标记的用于检测甲胎蛋白的电化学生物传感器。其包括链霉亲合素修饰的磁性微球、生物素修饰的甲胎蛋白(AFP)抗体、CdS量子点标记的生物条码DNA、第二抗体和金胶纳米粒子,通过CdS量子点的标记和溶出、Cd2+的富集和检测实现对甲胎蛋白的放大检测。这种定量检测方法既具有较快的检测速度,又具有高的检测灵敏度,其线性检测范围是0.02 ~ 3.5 ng/mL,检测限达9.6 pg/mL,为经典的酶联免疫吸附分析法的100倍。2基于生物条码的概念设计了一种非酶标记的用于检测DNA片段的电化学生物传感器。其包括玻碳电极的沉积金膜修饰、巯基修饰的DNA在电极上的捕获、目标DNA的杂交以及经过修饰的信号DNA的与目标DNA的杂交,由此构成了“三明治”形的检测结构。通过CdS量子点的标记和溶出、Cd2+的富集和检测实现对目标DNA的放大检测。此方法的线性检测范围是1.0×10?14 ~ 1.0×10?13 M,检测限是4.2×10?15 M,说明其具有较高灵敏度。同时检测了两碱基错配和完全非互补的目标DNA序列,前者的电化学信号很弱,后者则基本无信号,说明其具有良好的选择性。3基于新型标记物巯基二茂铁和纳米金粒子设计了一种直接检测肿瘤细胞K562的电化学传感器。其包括巯基十一烷酸和巯基十六烷酸分别在金电极和纳米金粒子上的修饰以及刀豆蛋白(Con A,一种相对于甘露糖的凝集素)与巯基十一烷酸和巯基十六烷酸中羧基的反应。通过凝集素-刀豆蛋白和细胞表面半甘露糖残基的特异性结合作用,金电极、K562细胞和经过修饰的纳米金粒子构成了“三明治”形的检测结构。循环伏安电化学信号的强弱与巯基二茂铁的量成正比例关系,巯基二茂铁的量间接地反映了检测的细胞含量,从而构成了检测细胞的电化学传感器。检测K562细胞的线性范围是5×102 ~ 5.0×107 cells mL-1,检测限是221 cells mL?1,说明其具有很好的检测灵敏度。
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