论文部分内容阅读
索拉菲尼(Sorafenib,SOR)是全球范围内首个获得FDA批准用于晚期HCC的多激酶抑制剂药物。临床上常将其与阿霉素、吉西他滨等细胞毒性药物联用,以增强对肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的治疗效果。但由于不同药物间存在药代动力学、组织分布差异,在传统多种药物的联合治疗过程中,无法确保联用药物进入人体后能在病灶部位达到合适的比例及浓度,这极大地限制了治疗效果。针对上述问题,本课题设计了一种甘草次酸(Glycyrrhetinic acid,GA)介导的肝靶向索拉菲尼与奥沙利铂(Oxaliplatin,OXA)共载脂质体(GA-OS-Lip),以实现两种药物在肿瘤细胞内的有效共递送,达到协同治疗效果,以提高HCC治疗效果。本课题基于GA设计合成了新型肝靶向分子GA-DSPE;通过Chou-Talalay联合指数法筛选两种药物的最佳联用比例;采用薄膜水化法制备GA-OS-Lip并通过正交试验对处方进行优化;利用纳米粒径电位分析仪测定粒径与Zeta电位;透射电镜观察载体形貌;通过高效液相色谱仪和紫外分光光度计分别测定脂质体中OXA与SOR的包封率和载药量;差示扫描量热仪考察了热力学特性;采用透析法考察体外药物释放行为;以粒径及多分散性系数为指标,考察载体在不同介质中的稳定性;以CCK-8法及Annexin V-FITC/PI双染法对不同OXA与SOR联用剂型对HepG2的细胞毒性和诱导细胞凋亡能力进行了探究;利用激光共聚焦显微镜及流式细胞仪观测细胞对脂质体的摄取行为;采用近红外荧光活体成像技术考察脂质体在体内的组织分布。结果表明,OXA与SOR联用摩尔比为1:1时,具有最强协同治疗效果;在优化条件下制备得到的GA-OS-Lip粒径为(119.0±2.15)nm,PDI为0.196±0.021,Zeta电位为(-34.82±2.84)mV,呈球状,OXA与SOR的包封率分别为(33.8±3.72)%和(70.80±6.80)%,载药量分别为(1.45±0.14)%和(1.61±0.22)%;GA-OS-Lip在37℃条件下,于pH 7.4 PBS缓冲液、细胞培养基和10%血浆溶液中均展现出良好的稳定性;GA-OS-Lip在体外释放实验中展现出显著的缓释作用,48 h内OXA与SOR分别释放了90%与70%;细胞毒性及凋亡实验表明,相较于游离药物(IC50=5.057/5.057)及非靶向共载脂质体OS-Lip(IC50=5.079/5.079),GA-OS-Lip(IC50=3.242/3.242)对HepG2细胞具有更强的杀伤作用;体外细胞摄取实验结果表明GA能显著促进HepG2细胞对脂质体的摄取;近红外荧光活体成像实验显示,肝靶向脂质体能够增加药物在肝脏的富集,延长持续时间。综上所述,GA-OS-Lip能够实现OXA与SOR在病灶部位的有效共递送,靶向分子GA的修饰能够提高肿瘤细胞对脂质体的摄取以及脂质体在病灶部位的富集,显著增强两种药物联用的HCC治疗效果。