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本论文为了探索韧皮部mRNA远距离传递机制,和FT mRNA移动的可能性,构建了35S.PtFT∶GFP,35S∶PtFT GFP tRNA22和35S∷PtFT∶tRNA22超表达载体,以野生型番茄分别与超表达PtFT GFP,PtFT GFP tRNA22和PtFT tRNA22转基因番茄进行嫁接,以GFP荧光示踪研究FT的传导能力、方向、途径和分配规律;通过在PtFT和PtFT GFP基因序列后面加tRNA22,来研究改造的FT mRNA在促进转基因植株成花能力上有增强。主要研究结果如下: (1)对实验室前期克里曼丁/早实枳种间嫁接组合转录组测序数据分析,筛查到1073个可移动的mRNA,从中挑取了61个基因进一步验证。根据候选基因目标SNP附近PCR扩增产物测序分析,有15个mRNA分子移动获得证实,其中8个mRNA由接穗向砧木移动,有5个mRNA由砧木向接穗移动,有2个mRNA发生双向移动。 (2)通过利用PlaMoM(Plant Mobile Macromolecules)TLS finder在线分析工具(http://www.systembioinfo.org/plamom/),对检测发现的mRNA的TLS类似结构进行了扫描,发现向上移动和向下移动的mRNA中分别有8.6%和14.9%具有发夹结构,说明含有TLS类似结构的基因可能有利于mRNA移动或移动过程的稳定性。 (3)构建了3SS.∶PtFTGFP、35S∷PtFT.GFP∶tRNA22和35S∷PtFT tRNA22超表达载体,分别转化番茄,获得了超表达阳性株系,从DNA水平和RNA水平进行阳性检测,结果表明外源基因已经成功整合到番茄的基因组中。 (4)对转基因株系进行表型观察,结果发现与野生型番茄相比,PtFT∶GFP和PtFT∶tRNA22超表达番茄都表现出早花现象,而PtFT∶GFP∶tRNA22超表达番茄没有表现出明显的早花现象。这表明PtFT∶GFP和PtFT∶tRNA22基因的超表达均可以促进番茄的早花。 (5)将野生型番茄分别嫁接到超表达PtFT∶GFP∶tRNA22和PtFT∶tRNA22转基因番茄上,利用荧光显微镜研究PtFT∶GFP∶tRNA22在蛋白质水平的移动,结果发现在野生型接穗中嫁接口上1cm处检测到荧光信号,在嫁接口上4cm处荧光信号消失,说明PtFT∶GFP∶tRNA22基因可以在蛋白质水平发生移动。但在接穗部位未检测到外源PtFT mRNA,表明外源PtFT∶GFP∶tRNA22和PtFT∶tRNA2的mRNA未能在砧穗间移动。