转几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因玉米抗纹枯病研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhengjjing
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玉米是我国主要的粮食作物和重要的工业原料,在国民经济中起着重要的作用。纹枯病是玉米的一种毁灭性病害,此病害已成为限制玉米高产高质的主要因素之一。几丁质酶基因和p-1,3-葡聚糖酶基因是两种广谱性抗真菌病害基因,且具有协同增效作用,这两个基因被广泛应用于植物抗病基因工程中,用于获得抗病虫害的作物新品种。目前这方面已取得了很多研究成果。本研究分别提取菜豆和烟草的总RNA,以总RNA为模板,RT-PCR得到菜豆几丁质酶基因和烟草p-1,3-葡聚糖酶基因。在此基础上,构建了含有菜豆几丁质酶基因和烟草p-1,3-葡聚糖酶基因的融合基因植物表达载体和双价基因植物表达载体,采用农杆菌介导法将融合基因和双价基因表达载体导入玉米自交系A188和Z31的幼胚及其幼胚诱导的胚性愈伤组织中,通过除草剂双丙氨膦的筛选得到的抗性愈伤经过分化再生后获得再生植株,通过表型鉴定获得了高效抗立枯丝核菌的玉米转基因植株。目前获得了以下实验结果:1.构建了含有菜豆几丁质酶基因和烟草p-1,3-葡聚糖酶基因的融合基因植物表达载体和双价基因植物表达载体。2.获得了To代再生植株45株,对再生植株bar基因、chi基因、glu基因进行PCR检测,分别有33株、25株、27株呈阳性,转基因植株中同时整合有这3个外源基因的有20株。3.转基因植株离体叶片纹枯菌接种试验结果表明:多数转基因植株对立枯丝核菌的抗性高于对照非转化植株,其中部分植株对立枯丝核菌表现出高效抗性。4.目前已收获转基因植株T0代种子并已种植,T1代转基因植株除草剂筛选工作正在进行中。
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