Th17细胞因子在小鼠真菌性角膜炎中的表达

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目的通过建立真菌性角膜炎小鼠模型,观察真菌性角膜炎的发生发展,探索TH17细胞因子在真菌性角膜炎中的表达情况,初步探讨IL-17及TH17细胞在真菌性角膜炎免疫学中的作用。方法清洁级BALB/c小鼠随机分成两组,其中一组为真菌感染组,小鼠右眼采用角膜表层镜片法建立茄病镰刀菌性角膜炎模型;另一组为损伤对照组,以PBS代替真菌菌液采取与感染组相同方法处理小鼠右眼。分别于感染后第1、3、5、7天,裂隙灯显微镜观察角膜炎特点并行临床评分;HE染色观察角膜病理变化;实时荧光定量PCR检测角膜中Th17细胞因子(IL-17)及其特异性转录因子RORγt的mRNA基因的表达变化;酶联免疫吸附试验检测IL-17因子蛋白的表达变化。结果1.病变特征所有小鼠真菌性角膜炎模型建立成功,真菌感染早期呈全角膜的弥漫性炎症反应,浸润混浊进行性加重,感染后3天角膜灰白色雾状混浊,5天时病变典型,角膜周边新生血管长入,中央形成溃疡,第7天后病灶趋向好转,总病程持续约12天。临床评分各时间点有统计学差异(P<0.05)。2.病理学检查HE染色可见早期角膜基质水肿,感染后第5天角膜基质紊乱多形粒细胞浸润明显增多,前房内可见渗出,晚期角膜基质中可见新生血管及管内红细胞,溃疡被瘢痕组织取代。3.Real time PCR与ELISA检测结果Thl7细胞因子(IL-17)和Th17细胞特异性转录因子(ROR γt)基因mRNA在真菌感染角膜后均出现表达,于第3、5、7天显著高于损伤对照组(P<0.01),且组内比较5天时表达量最高(P<0.01); IL-17因子蛋白感染后各时间点表达量显著高于损伤对照组(P<0.01)。结论新型CD4阳性细胞亚群Th17细胞在真菌性角膜炎中分化,参与其免疫反应,Th17细胞因子(IL-17)在真菌性角膜炎中发挥重要作用。
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