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目的:本课题以乙醇为溶剂,研究微波辅助萃取瑞香狼毒总黄酮(SCTF)的最佳工艺条件;分离纯化得到有效单体,光谱鉴定确定结构类型;研究有效单体的体外抗肿瘤活性。
方法:
1.SCTF的提取、分离、纯化:以乙醇为溶剂,先用传统中药提取分离方法(索氏提取法)提取瑞香狼毒总黄酮,再依次上聚酰胺柱,大孔吸附树脂柱和硅胶柱纯化黄酮类化合物。
2.微波辅助萃取正交试验设计:首先对固液比(A)、溶剂浓度(B)、微波辐射时间(C)、微波辐射功率(D)四个单因素对SCTF提取率的影响进行实验,在此基础上设计L<,9>(3<'4>)正交实验组合表,用岛津-2550型紫外一可见分光光度计,在黄酮的最佳吸收波长298nm处测定吸光度,由回归方程算出的总黄酮浓度为指标,来研究微波辅助萃取SCTF的最佳工艺条件。
3.纯化得到的SCTF分别作<'1>HNMR、<'13>CNMR和MS鉴定。
4.体外抗肿瘤实验:SCTF以0.063.1.000μg/ml浓度处理人宫颈癌细胞Hela和结肠腺癌细胞SW480,以自动酶标仪检测细胞MTT转化率,以肿瘤抑制率为指标考察其抗肿瘤药理活性。
结果:
1.SCTF化合物纯度接近95%,经定性分析和波谱解析确定为双黄酮类化合物。可作为总黄酮定量分析的对照品。
2.微波提取优化工艺条件为:B<,3>C<,3> A<,2>D<,3>,即溶剂浓度为90%,辐射时间为60秒,固液比为1:15,微波功率为900W时,总黄酮提取率比较理想。其中溶剂浓度对总黄酮提取率有显著性影响(P<0.05)。微波辅助萃取总黄酮的相对提取率为56.79%~100.41%。
3.SCTF在0.063-1.000μg/ml药物浓度范围对人宫颈癌细胞Hela和结肠腺癌细胞SW480的MTT甲臜的形成均有抑制作用,抑制率分别为9.11%-72.59%,6.32%-63.01%。
结论:本试验将常压微波醇提取技术首次应用于SCTF成分的提取,并与常规提取方法作了比较。结果表明,以乙醇为溶剂的常压微波提取SCTF成分的提取方法省时,并具有较高产率、安全、节约能源,符合绿色环保要求,设备简单的优点。正交试验优化的提取工艺条件为B<,3>C<,3>A<,2>D<,3>.MTT法检测结果表明:SCTF对人宫颈癌细胞Hela和人结肠腺癌细胞SW480都具有较好的抗肿瘤作用,存在进一步分离筛选和结构修饰的价值。