癌症作为发病率及死亡率极高的全球第二大疾病,近年来发病率呈逐年上升的趋势。目前,癌症治疗方法主要包括放疗、化疗、手术治疗和免疫治疗等。溶瘤病毒作为免疫治疗的分支,因其靶向性高、治疗效果和安全性好、成本低廉等优势正逐渐受到人们的关注。人源C型凝集素CLEC2A是一个非二硫键连接的同型二聚体表面受体,在人角质形成细胞中作为活化的受体参与细胞免疫监控。CLEC2A可以通过与NK细胞上的NKp65受体结合激活NK细胞控制皮肤鳞状细胞癌的进展。本论文利用溶瘤痘苗病毒载体携带人C型凝集素构建重组溶瘤痘苗病毒onco VV-CLEC2A,深入探究其对肝癌和结直肠癌的作用及其分子机制。本文通过MTT、Hoechst染色法、流式细胞术、Western blot等一系列方法检测onco VV-CLEC2A对人肝癌细胞Hu H-7、肺癌细胞NCI-H460和A549、结直肠癌细胞HCT116和SW620的作用,结果表明onco VV-CLEC2A通过诱导凋亡对上述细胞产生了显著的杀伤作用。3D肿瘤球模型杀伤实验表明,onco VV-CLEC2A对HCT116及SW620细胞肿瘤球具有明显的杀伤作用,但对Hu H-7细胞肿瘤球则无明显作用。溶瘤病毒选择性地在肿瘤组织内复制,进而感染杀伤肿瘤细胞,病毒的复制能力是一个关键的因素。本文通过检测发现CLEC2A能够显著促进溶瘤痘苗病毒在人肝癌细胞Hu H-7、肺癌细胞NCI-H460、结直肠癌细胞HCT116和SW620内的复制进而杀伤肿瘤。进一步实验表明onco VV-CLEC2A上调人肝癌细胞Hu H-7、结直肠癌细胞HCT116和SW620内转录因子AP-1（c-Jun、c-Fos）磷酸化进而促进炎症相关细胞炎症因子的表达继而诱发机体的天然免疫反应。onco VV-CLEC2A还通过激活ERK进而促进病毒复制。此外,Western blot实验表明onco VV-CLEC2A通过上调人肝癌细胞Hu H-7、结直肠癌细胞HCT116和SW620内Hippo通路的Mst1蛋白的磷酸化抑制总Yap蛋白的表达,从而促进病毒的复制。代谢对于痘苗病毒的复制和包装具有较大的影响。本论文的抑制剂联合实验和Western blot实验表明在人肝癌细胞Hu H-7、结直肠癌细胞HCT116和SW620中,激活AMPK会抑制onco VV-CLEC2A的复制,抑制m TOR的活性则促进onco VV-CLEC2A的复制;q PCR实验提示AMPK通过影响葡萄糖转运的代谢进而影响onco VV-CLEC2A的复制。综上所述,本研究证明携带人C型凝集素基因CLEC2A的溶瘤痘苗病毒onco VV-CLEC2A能够对多种癌细胞产生良好的抗肿瘤作用,其抗肿瘤机制可能与CLEC2A促进细胞内炎症反应、激活Hippo信号通路和改变癌细胞内代谢反应有关。本研究将为凝集素的应用拓宽思路,为溶瘤病毒的设计和肿瘤免疫治疗提供了新参考。