研究背景多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄期女性常见的内分泌紊乱性疾病,主要表现为生殖障碍和代谢异常,现代医学针对PCOS多以对症治疗为主,多采用激素类药物,PCOS属慢性病需长期服用药物,西药副作用多且停药后病情易反复。近年来,针对中医药治疗此病的研究越来越多,导师经过多年临床研究,自创滋肾清热利湿化瘀方(滋肾方)运用于临床,临床观察疗效显著,但其可能作用的分子机制有待探究。卵泡发育障碍为PCOS发病主要表现,颗粒细胞(granulosa cells,GC)是卵泡发育的重要组成部分,卵泡发育成熟需要它的不断分化和增殖,然而,PCOS患者GC较正常少,GC层萎缩而薄,这可能是PCOS患者发生排卵障碍的主要原因。因此,在临床证实疗效的基础之上,从基础实验的角度探讨滋肾方与PCOS颗粒细胞间具体作用机制,将对疾病的发生发展具有重要意义。目的1.本课题通过临床研究,观察滋肾方对肾阴虚PCOS患者BMI,血液中性激素及脂代谢相关指标的影响,为后期中医药治疗PCOS提供临床依据。2.以前期的临床研究为基础,开展细胞实验研究,探究滋肾方作用于PCOS可能的机制。方法1.选取江西中医药大学附属医院门诊就诊的符合纳入标准的PCOS患者35例,采用自身对照的方式进行研究,口服中药复方治疗3个月,观察治疗前后BMI及血中性激素及脂代谢指标的变化情况。2.选取45只体重在200—260g范围内的雌性SD大鼠,将大鼠分为两组,中药组和空白组,每组各20只,其余5只大鼠备用;所有大鼠连续灌胃14天,空白组按2ml/100g体重的比例进行生理盐水灌胃;中药组按照2ml/100g体重的比例进行中药汤剂灌胃,饲养灌胃14天后,麻醉大鼠,通过心脏采血法取大鼠血液样品,后处死大鼠,血液样品室温静置过夜,4℃下以3000rpm离心10分钟收集血清。3.选取20例生殖中心医院符合纳入标准的行IVF治疗的肾阴虚PCOS患者,取人卵泡液,提取卵泡液中的GC,采用中药组和空白组大鼠的含药血清干预人卵巢GC,置于含5%CO~237℃的培养箱中培养48h,显微镜下观察细胞生长情况,采用MTT法绘制各组颗粒细胞生长曲线,通过RT-q PCR法检测各组GC中C/EBPβ基因的表达量。结果1.滋肾方治疗3个月后,患者的性激素指标改善明显,血中LH、LH/FSH比值、T的水平治疗前较治疗后相比显著下降,有显著统计学差异(P<0.01);血中FSH水平治疗前较治疗后相比,虽有增高但差异无统计学意义(P>0.05);血中E2水平治疗前较治疗后相比升高明显,有显著统计学差异(P<0.01)。2.滋肾方治疗3个月后,患者体重指数BMI水平与治疗前相比下降,有显著统计学差异(P<0.01)。3.滋肾方治疗3个月后,患者的脂代谢指标改善明显,TG、LDL的水平治疗前较治疗后相比显著下降,有显著统计学差异(P<0.01);HDL的水平治疗前较治疗后相比升高明显,有显著统计学差异(P<0.01)。4.C/EBPβ在两组GC中都有表达,且中药组GC中的C/EBPβm RNA的表达明显高于空白组,有显著统计学差异(P<0.01)。5.与空白组比较,观察中药组48h后GC数量明显增多,且OD值在1d至7d均较之高。结论1.滋肾方能有效改善肾阴虚PCOS患者体内性激素、BMI、脂代谢相关指标,从而对PCOS产生治疗作用;2.滋肾方可能通过上调C/EBPβm RNA的表达量促进PCOS颗粒细胞的增殖,从而有效治疗PCOS疾病,这可能是滋肾方作用于PCOS疾病可能的机制之一。