土荆皮乙酸对TGF-β1介导的A549细胞迁移、侵袭及上皮间质转化的影响

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaotang111
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目的:研究土荆皮乙酸对人肺癌细胞A549生存活力的影响、及在TGF-β1诱导下细胞迁移、侵袭及上皮间质转化的抑制作用,为临床应用土荆皮乙酸延缓非小细胞肺癌疾病进程提供实验依据。材料与方法:采用不同浓度的土荆皮乙酸(0、10、20、40、60、80μmol/l)培养人肺癌细胞A549,于0 h,12 h,24 h,36 h,48 h采用CCK8法检测土荆皮乙酸对人肺癌细胞A549生存活力的影响,并确定最适的给药浓度及最适作用时间。取人肺癌细胞A549进行培养,用TGF-β1进行干预,诱导细胞发生迁移、侵袭及上皮间质转化。将实验分为三组,分别为A空白组(A549细胞+培养基)、B诱导组(A549细胞+TGF-β1)、C实验组(A549细胞+TGF-β1+最适浓度土荆皮乙酸)。采用划痕迁移实验、Transwell迁移实验及Transwell侵袭实验检测三组细胞迁移、侵袭能力的改变。采用免疫荧光法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达情况。采用Western Blot方法检测上皮间质相关标记物E-cadherin、α-连环蛋白(α-catenin)、波形蛋白(Vimentin)、N-cadherin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达水平。采用RT-PCR法检测上述上皮间质转化相关蛋白E-ca、α-ca、Vim、Nca、α-SMA m RNA表达水平。结果:1.CCK8结果显示,土荆皮乙酸能有效抑制人肺癌细胞A549的生存活力,并且在一定范围内,呈浓度时间依赖性,当土荆皮乙酸浓度40μmol/l,作用48 h时,肿瘤细胞生长达半数抑制率,因而选择浓度为40μmol/l的土荆皮乙酸作为最佳作用浓度,最佳作用时间为48 h。2.细胞划痕实验及Transwell小室迁移侵袭实验结果显示,经过TGF-β1诱导后的人肺癌细胞A549具有明显增强的迁移、侵袭能力,而在最适浓度土荆皮乙酸作用后,能有效抑制TGF-β1诱导下人肺癌细胞A549的迁移、侵袭能力。3.RT-PCR实验结果显示,与A空白组相比,B诱导组下调了上皮标记蛋白E-ca、α-ca的m RNA水平,而提高了相关间质标记蛋白Vim、N-ca、α-SMA的m RNA水平(P<0.05)。与B诱导组相比,C实验组上调了上皮标记蛋白E-ca、α-ca的m RNA水平、而下调了间质标记蛋白Vim、N-ca、α-SMA的m RNA水平(P<0.05)。4.Western blot技术检测上皮间质转化相关标记蛋白结果显示,与A空白组相比,B诱导组上皮标记蛋白E-ca、α-ca表达下调而相关间质标记蛋白Vim、N-ca、α-SMA和基质金属蛋白酶标记物MMP2、MMP9表达增强(P<0.05)。与B诱导组相比,C实验组上皮标记蛋白E-ca、α-ca表达增强而间质标记蛋白Vim、N-ca、α-SMA及MMP2、MMP9表达下调(P<0.05)。5.细胞免疫荧光实验结果显示,经过TGF-β1诱导后的人肺癌细胞A549上皮标记蛋白E-ca在细胞膜、质表达下降,而间质标记蛋白N-ca在细胞膜、质表达增强。而在最适浓度土荆皮乙酸组,显示该单体能增强TGF-β1诱导后人肺癌细胞A549上皮标记物E-ca在细胞膜、质的表达情况,而使间质标记蛋白N-ca在细胞膜、质的表达下降。结论:土荆皮乙酸能有效抑制人肺癌细胞A549的生存活力,同时可以抑制在TGF-β1诱导下肺癌A549细胞迁移、侵袭能力,这可能与土荆皮乙酸抑制人肺癌细胞A549上皮间质转化的作用有关。
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