茶树精油消毒剂开发及杀菌机理研究

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互叶白千层(Melaleuca alternifolia),系桃金娘科白千层属植物,长绿状小乔木或灌木。茶树精油(Tea Tree Oil)是利用水蒸气蒸馏技术从互叶白千层枝叶中提取出来的一种油状液体。作为一种天然抗菌剂,茶树精油在药物临床研究中扮演着十分重要的角色,有望成为一种可缓解全球耐药性危机的天然药物,有着广泛的开发利用前景。本研究结合茶树精油的性质,研制出一个以茶树精油为主要成分的新型消毒剂。本文主要从茶树精油提取工艺、化学成分、活性、特征成分含量及杀菌机理方面进行研究。1.采用水蒸气蒸馏技术结合正交试验法筛选出互叶白千层枝叶中茶树精油的最佳提取工艺,即:在料液比1:20,浸泡6 h,提取6 h的条件下,平均提取率达到2.293%。2.采用气质联用色谱法对提取的茶树精油与Main Camp牌茶树精油化学成分进行研究。结果显示:前者分离出62种成分,鉴定出50种化合物,鉴定出的化合物相对含量占总量的98.97%;后者分离出44种成分,鉴定出35种化合物,鉴定出的化合物相对含量占总量的99.49%。两者中都含有较多的松油烯-4-醇,都接近松油烯-4-醇型茶树精油。3.采用管蝶法对提取茶树精油与Main Camp牌茶树精油抑菌活性进行比较,结果显示:两种茶树精油对G~+(S.aureus、S.albus)、G~-(E.coli、P.aeruginosa)、真菌(C.albicans)均具有一定的抑制作用,前者对8种病原微生物的抑制效果弱于Main Camp牌茶树精油(除E.coli、S.albus外),后者对8种菌株的抑制作用强于阳性对照组(除E.coli、C.albicans外),其中对S.aureus的抑制效果更明显。4.应用气相色谱法建立了茶树精油消毒剂中松油烯-4-醇、1,8-桉叶素的检测方法,并对其稳定性进行研究。结果显示:1,8-桉叶素在浓度0.013~0.41 mg/mL与峰面积呈现良好的线性关系(R~2=0.9999),松油烯-4-醇在浓度0.175~5.575 mg/mL与峰面积呈现良好的线性关系(R~2=0.9999);1,8-桉叶素的平均加样回收率为99.190%,RSD为1.890%,松油烯-4-醇的平均加样回收率为102.580%,RSD为1.450%。茶树精油消毒剂在运输及贮藏的过程中需在低温(25℃以下)、阴凉、干燥、避光的条件下进行。采用聚乙烯瓶密封,有效期大于1年。5.以金黄色葡萄球菌为试验菌株对茶树精油的抑菌机理进行研究,结果显示:茶树精油具有抑制和清除金黄色葡萄球菌生物膜的形成能力,其抑菌作用位点可能位于细菌细胞膜上,由于细胞膜的完整性被严重破坏,细胞膜通透性增大,引起细胞裂解,使细胞内容物泄露,从而导致菌体细胞死亡。
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