下肢慢性缺血性病变是血管外科多发疾病,尽管在这方面的治疗已取得很多进展,但仍有部分病人因为各种因素,无法依赖手术或介入治疗等方法实现再血管化。这些病人在最大限度的药物治疗下仍反复出现症状,甚至有面临截肢的可能。近年来,随着血管内皮前体细胞(EPC)的发现,加上自体骨髓移植具有操作简单、无免疫排斥等优点,EPC 和自体骨髓干细胞移植(ABMCT)治疗下肢慢性缺血性疾病已成为人们关注的焦点。 ABMCT 是近年来出现的治疗慢性缺血性疾病的新途径,但骨髓干细胞增殖并分化为血管内皮细胞的机制及调控仍不清楚,如何控制疗效尚需进一步研究。我们在临床工作中发现,由于患者往往存在年龄偏高、患病时间长、并发症多等因素,导致体内骨髓干细胞数量相对减少、向 EPC 分化能力差以及机体不能为移植的细胞提供满意的分化增殖环境等问题,从而影响了疗效。 中医药应用于治疗性血管新生已经取得很多成果。相关研究证明,“活血生肌”“补气活血”等治则及相关方药,可能具有促血管新生作用。 造成下肢缺血的原因主要有动脉硬化和糖尿病血管病变等,属中医 “脱疽”“脉痹”范畴。祖国医学认为,久病耗气,气虚无力推动血行,血行不畅,日久瘀滞脉络,而致脱疽,且此病患者多为中老年人,气血本虚。根据我们多年来的经验,辨证多属气虚血瘀证,临床应用益气活血法治疗取得较好疗效。 本项目研究即以中医气血相关、益气活血理论为基础,结合临床疗效,分别选用益气、活血的代表药物黄芪、三七,从实验角度探讨其对体外培养的骨髓干细胞向 EPC 分化扩增的促进作用,为临床 ABMCT 联合中药治疗下肢慢性缺血性疾病提供实验依据,并为进一步研究中药现代化及其促进 EPC 增生的机制奠定基础。 本实验常规采集下肢慢性缺血患者骨髓血,密度梯度离心法分离单个核细胞,不同条件体外贴壁培养,探讨黄芪、三七对骨髓干细胞体外转化并扩增 EPC 的促进作用及其可能的机制。 黄芪注射液、血塞通粉针剂各分为高、中、低三个剂量组,并设立空白对照。培养过程中定期观察细胞形态,三周后以流式细胞仪检测各组 CD34+细胞百分比。 结果显示:⑴从形态学看,贴壁细胞中绝大部分为梭形细胞,核居中,多聚集成集落;随培养时间的延长,细胞铺成单层,排列成漩涡状,呈梭形或多角形,显示这些细胞具有许多内皮细胞的形态和特性。⑵流式细胞仪检测各组 CD34+细胞百分比:与对照组相比,黄芪低、中剂量及三七中、高剂量组 CD34+细胞的百分比均显著增加;黄芪高剂量组 CD34+细胞百分比略有升高、三七低剂量组 CD34+细胞百分比则下降,但与对照组相比都不具统计学意义,推测三七总皂苷可能具有双向调节作用,低剂量时反而抑制 CD34+细胞的表达。同时数据还显示,黄芪中浓度组、三七高浓度组促进 CD34+细胞增殖的作用最好,且整体看来三七组的促进作用更为明显。骨髓单个核细胞中的 CD34+部分大多为 EPC。因此,上面的结果也反映出黄芪、三七对 EPC 的促进作用。