盐地碱蓬SsPrx Q基因的克隆与功能鉴定

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许多代谢反应像光合作用、光呼吸以及呼吸作用都可以产生活性氧,尤其是在极端的环境中.活性氧不可避免的对生物大分子如脂质、蛋白质以及DNA等造成氧化损伤,但也可以作为信号分子调节基因的表达和酶活性并参与防御反应.因此活性氧必须被控制在适当的水平以维持正常的细胞代谢.生活在有氧条件下的生物形成了一系列抗氧化系统来保护细胞免受氧化损伤.一种被称作过氧还蛋白(Prx)的不含血红素辅基的过氧化物酶家族最近引起人们的注意,它广泛存在于所有的生物中,可以利用硫氧还蛋白(Trx)、谷氧还蛋白(Grx)以及cyclophilinA等作为电子供体还原H<,2>O<,2>以及各种烷基过氧化物,生成水和相应的醇.大量的研究表明Prxs在光合,韧皮部代谢和环境胁迫中具有重要作用.植物中的过氧还蛋白共分为四类:1-Cys Prx、2-Cys Prx、TypeⅡ Prx以及Prx Q.其中Prx Q首先从佛甲草(Sedum linear)中被克隆,与细菌铁蛋白共迁移蛋白(BCP)同源性很高.目前对Prx Q的许多研究主要集中在生化功能方面,而对它的生理功能、表达特点研究较少.为了进一步对Prx Q进行酶活分析,用PreScission Protease酶切GST融合蛋白,得到大约24 KDa的蛋白.它可以保护质粒免受自由基的破坏,并具有硫氧还蛋白依赖的过氧化物酶活性,硫氧还蛋白可以作为它的电子供体.利用花浸染法将农杆菌携带的双元表达载体pROKⅡ+SsPrx Q转入拟南芥,通过多次筛选已经获得了转基因拟南芥的纯合植株.PCR和Southem结果证明外源SsPrx Q已整合到拟南芥基因组中.Northern杂交结果表明插入拟南芥中的SsPrx Q基因已经正常转录.对获得的转基因植株的表型分析发现,在低温以及100mM NaCl处理下,转基因植株的生长状况明显好于野生型,在一定程度上提高了其对胁迫的耐受能力.
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