当归多糖的结构分析及其对大鼠复发性阿弗他溃疡模型影响的研究

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目的:1对当归多糖(Angelica sinensis polysaccharides,ASP)的化学结构和糖含量测定,探讨其对实验性大鼠复发性阿弗他溃疡(Recurrent aphthous ulcer,RAU)模型的影响.2采用免疫方法建立实验性SD大鼠RAU模型,分析不同浓度ASP对大鼠外周血T淋巴细胞亚群及溃疡组织和血清表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)的影响。讨论其促进RAU愈合的物质基础,也为进一步研究ASP治疗RAU的药物开发提供理论依据和研究基础。方法:1采用苯酚-硫酸法测定多糖样品中糖含量,利用核磁共振波谱仪、傅里叶变换红外光谱分析及紫外光谱法对ASP的化学结构做初步研究和分析。2采用免疫法建立实验性大鼠RAU模型,观察建模过程中SD大鼠体重、摄食量的变化。分别在建模成功后及灌服ASP后,切取大鼠口腔黏膜组织标本,行常规HE染色,观察口腔黏膜组织病理变化状况。3采用流式细胞术(FCM)检测建模及灌服不同浓度的ASP后,外周血T淋巴细胞亚群的变化。4免疫组织化学法(SABC法)测定SD大鼠建模前后口腔黏膜组织内EGF的表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA法)检测灌服不同浓度即100、150、300 mg/kg的ASP后,大鼠血清EGF的含量变化。结果:1苯酚-硫酸法测定当归多糖的糖含量,建立出线性回归方程为Y=18.5904X-0.0135,最后测定该当归多糖样品中糖含量为95.98%。2通过核磁共振仪、红外光谱分析及紫外光谱分析得出,该多糖的糖链构型为吡喃型,此种多糖内主要含有α-阿拉伯糖和β-半乳糖。多糖的糖基中不存在甘露糖苷,该多糖内无蛋白质、多肽及核酸类物质。3采用免疫法即注射完全弗氏佐剂+口腔黏膜均浆组织的方法,成功建立SD大鼠RAU模型。经FCM得出:实验组CD4+、CD4+/CD8+均低于对照组P<0.05,CD8+细胞数高于对照组,但P>0.05无显著性差异。灌服20天不同浓度ASP后,使降低的CD4+细胞数、CD4+/CD8+比值都得到回升。4表皮生长因子的蛋白颗粒在正常口腔粘膜中主要分布在基底细胞层和棘细胞层,阳性表达出现在胞浆中,随上皮的分化其着色逐渐减弱并最后消失,实验显示EGF在大鼠口腔黏膜溃疡组织中表达明显减少。5给大鼠灌服不同浓度(100、150、300mg/kg)的ASP后,采用ELISA法测定大鼠血清EGF,结果显示灌服300 mg/kg的ASP300组中大鼠血清EGF含量较模型组和其它组浓度组较高(P<0.05),其次是ASP150组和ASP100组。结论:苯酚-硫酸法可测定当归多糖的糖含量,通过核磁共振仪、红外光谱分析及紫外分析得出该当归多糖的糖链构型为吡喃型,此种多糖内主要为α-阿拉伯糖和β-半乳糖。多糖的糖基中不存在甘露糖苷,并且多糖内无蛋白质、多肽及核酸类物质。采用免疫法即完全弗氏佐剂+口腔黏膜均浆组织的方法,成功建立了SD大鼠RAU模型,为进一步研究复发性阿弗他溃疡提供实验基础。实验显示EGF在RAU中的表达受到抑制,这可能与RAU的发病机制有着密切的联系。同时,ASP还提高了大鼠血清中EGF的含量,推断ASP与RAU愈合和EGF的含量显著增高有直接关系。从细胞免疫角度来看,甘肃岷县当归中提取的ASP能改善RAU大鼠外周血T淋巴细胞亚群失衡状态,促进溃疡的愈合,调节机体免疫功能,且具有促进免疫活性的作用。
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