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目的:研究miR-23a是否参与雌激素缺乏所致的线粒体损伤,并揭示其潜在的作用机制。 方法:1、动物分组:6月龄的C57BL/6雌鼠随机分成假手术组(Sham),去势组(OVX)和去势后补充雌激素组(OVX+E2);2、动物模型制备:OVX组,采用双侧卵巢切除术(bilateral oophorectomy)造模;OVX+E2组,双侧卵巢切除后按3.5μg/kg剂量每4天皮下注射一次17-β雌二醇(17-β estradiol,E2);Sham组,假手术但不切除卵巢;3、用超声波心动描记术观察各组小鼠心脏结构的变化;4、用透射射电镜下观察心肌细胞线粒体形态学变化;5、用ATP色度/荧光比色分析法检测心肌细胞ATP含量;6、用Real-Time PCR技术定量检测心肌细胞线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的含量;7、用Western Blot技术检测PGC-1α的表达变化;7、用Real-Time PCR技术定量检测miR-23a在miRNA水平上的变化;8、用荧光素酶(Luciferase)报告基因技术、细胞转染和反义寡核苷酸miRNA屏蔽(Masking)技术验证miR-23a对PGC-1α基因的直接调控作用。 结果:1、成功建立了动物模型;2、超声波心动描记结果显示,与Sham组相比,OVX组相对心室壁厚度(relative wall thickness,RWT)显著增厚,而OVX+E2组则无明显变化;3、透射电镜结果显示,与Sham组相比,OVX组心肌细胞异常线粒体占比显著升高,而OVX+E2组则无明显变化;4、ATP色度/荧光比色分析结果显示,与Sham组相比,OVX组心肌细胞ATP含量显著下降,而OVX+E2组则无明显变化;5、Real-time PCR结果显示与Sham组相比,OVX组心肌细胞mtDNA含量显著下降,而OVX+E2组则无明显变化;6、Western Blot结果显示,与Sham组相比,OVX组心肌细胞PGC-1α表达水平显著下降,而OVX+E2组则无明显变化;7、Real-time RT-PCR结果显示与Sham组相比,OVX组心肌细胞miR-23a表达水平显著升高,而OVX+E2组则无明显变化;体外给予E2能使乳鼠心室肌细胞(NRVCs) miR-23a表达水平显著降低;8、 Luciferase和miR-Mask结果证实miR-23a可直接抑制PGC-1α基因的表达。 结论:雌激素缺乏可使miR-23a上调,进而抑制PGC-1α表达,最终导致心肌线粒体损伤并引起左心室向心性重构(concentric left ventricular remodeling,CR)。