背景宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率均居于女性恶性肿瘤前列。世界各个国家的医学研究均发现香茶菜属植物具有广泛的药理学作用,香茶菜属植物种类繁多,根据我国中医的记载它不仅能清热解毒,抗菌消炎,还能抑制肿瘤以及治疗各种肝炎,对其他疾病也都有较好的功效。蓝萼甲素正是由唇形科香茶菜中分离提取出的二萜化合物,研究发现蓝萼甲素可抑制多种肿瘤细胞的增殖。蓝萼甲素治疗肿瘤方面有研究,但蓝萼甲素对宫颈癌细胞系HeLa细胞的增殖抑制作用和细胞周期的影响未见报道。目的本研究旨在通过体外培养宫颈癌HeLa细胞,主要研究蓝萼甲素对宫颈癌细胞系HeLa细胞的增殖抑制作用和细胞周期的影响,同时研究蓝萼甲素作用后细胞中p53蛋白表达的变化,为蓝萼甲素进一步应用于临床提供实验依据。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,复苏保存于液氮中的宫颈癌HeLa细胞,用1640培养基培养后用胰酶消化进行传代,每隔2到3天传代一次。1.细胞的增殖检测(MTT法)：取对数生长期的细胞,胰蛋白酶消化离心后搜集细胞,计数细胞。设定给药组48小时的浓度：1/μmol/L,1.5/μmol/L,3/μmol/L,4.5/μmol/L,6/μmol/L,7.5/μmol/L,9/μmol/L,10.5/μmol/L,12/μmol/L,13.5/μmol/L,和72小时浓度：1/μmol/L,2/μmol/L,3/μmol/L,4/μmol/L,5/μmol/L6/μmol/L,7/μmol/L,8/μmol/L,9/μmol/L,10/μmol/L,同时设定空白对照组。给药组分别按浓度大小按顺序加入的蓝萼甲素,培养48、72h后,加入MTT液,弃上清加入二甲基亚砜使完全混匀溶解结晶,在酶标仪器上于578nm处测其吸光度。2.流式细胞术(FCM)：取对数生长期的细胞,按105/L细胞密度接种于培养瓶,设空白对照组(不加药)和给药组(6、7.5μmol/L)。配制碘化丙啶染色液,染色后进行流式检测对HeLa细胞周期的影响。3.免疫印迹(Western blotting):取对数生长期的细胞,按105/L细胞密度接种于细胞培养皿,设阴性对照组(不加药)和给药组(1.5μmol/L)培养72小时。配置蛋白样品后采用BCA法测定蛋白样品浓度。把膜与胶片放在暗室结合曝光、显影、成像,ImageJ软件测定各组蛋白的灰度值,检测p53蛋白的表达。结果：1.MTT法检测,不同浓度的蓝萼甲素分别给药48、72小时后,对HeLa细胞的生长呈明显抑制作用。结果为药物作用48小时和72小时的IC50值分别为3μmol、1.5μmol。从数据和图表分析的结果可以看出,细胞增殖的抑制率与药物浓度及作用时间密切相关。各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)2.流式细胞仪检测细胞周期结果表明,与空白对照组相比较,蓝萼甲素可使HeLa细胞生长阻滞在G1期,S期所占比例随给药时间的延长不断减少,各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)3. Western blotting吉果显示,加入1.5/μmol/L的蓝萼甲素后p53的表达逐渐增加,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)结论1.蓝萼甲素能明显抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖。2.蓝萼甲素能明显阻滞宫颈癌HeLa细胞的细胞周期,有浓度和时间依赖性。