【摘 要】
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目的:寻求安全有效的治疗方式,以保护肝脏免受缺血再灌注损伤,为提高肝脏手术治疗的效果和改善患者的预后提供可能。本研究旨在:(1)在小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型中,探索小分子抑制剂SW033291对肝脏缺血再灌注损伤的影响;(2)在大鼠肝脏缺血再灌注模型中,探索电针足三里和阳陵泉穴对大鼠肝缺血再灌注损伤的疗效。方法:第一部分,建立小鼠70%肝脏缺血再灌注损伤模型。分别在再灌注6h,24h,48h和72
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目的:寻求安全有效的治疗方式,以保护肝脏免受缺血再灌注损伤,为提高肝脏手术治疗的效果和改善患者的预后提供可能。本研究旨在:(1)在小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型中,探索小分子抑制剂SW033291对肝脏缺血再灌注损伤的影响;(2)在大鼠肝脏缺血再灌注模型中,探索电针足三里和阳陵泉穴对大鼠肝缺血再灌注损伤的疗效。方法:第一部分,建立小鼠70%肝脏缺血再灌注损伤模型。分别在再灌注6h,24h,48h和72h取大鼠肝脏组织进行HE染色观测肝组织病理变化、免疫组织化学检测F4/80,MPO,CD86;肝脏组织酶联免疫吸附实验检测PGE2水平;取血清进行ALT、AST、IL-1β、IL-6和TNF-α水平检测;q RT-PCR检测肝脏组织IL-1β、IL-6、TNF-α、CXCL1、HGF、EGF、Nrf2、NLRP3的表达情况;第二部分,建立大鼠70%肝脏缺血再灌注损伤模型。分别在再灌注4h和24h,取大鼠肝脏组织进行HE染色、MPO检测;取血清进行ALT、AST、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平检测。结果:第一部分,(1)我们成功构建小鼠肝脏70%缺血再灌注损伤模型;(2)我们发现注射了小分子抑制剂SW033291的小鼠,可提高肝脏组织中的PGE2含量,血清中的AST和ALT,相对于注射了溶剂的小鼠明显减低,尤其是在48小时和72小时。同时也减弱了肝窦充血、水肿,肝细胞坏死,肝血管或肝血窦的淤血,以及肝小叶结构的破坏和降低肝组织损伤;(3)在给予小分子抑制剂SW033291药物组中,血清中和肝脏组织中的IL-1β,IL-6和TNF-α的表达都明显受到抑制。同时发现对于NLRP3和CXCL1的表达在给药组组中也得到不同程度抑制。此外,还能上调肝脏组织中Nrf2的表达;(4)在溶剂组中,我们发现在24h和48h时,中性粒细胞浸润明显,而在24h,巨噬细胞浸润明显。此外,给药组中,不仅炎症细胞浸润得到显著的改善,同时增加了肝脏组织中的肝脏生长因子表达。包括肝细胞生长因子(HGF)和表皮细胞生长因子(EGF)不管在溶剂组还是给药组中都一直随着时间表达增加,但在给药组中表达相对显著;第二部分,(1)IR组和NPA肝组织随着时间的推移肝细胞坏死、细胞质空泡化和肝窦充血越来越严重,然而,在EA组中,再灌注4小时和24小时后损伤均减轻,这与跟肝功能变化的情况一致;(2)再灌注4 h后,血清中炎性细胞因子达到最大值,IR和NPA组中炎性细胞因子TNF-α和IL-6的水平在再灌注8和24小时后迅速下降,但仍高于电针组。然而,IL-10水平在IR、NPA和EA组之间没有显着差异;(3)再灌注4 h和24h后,IR和NPA组的MPO浓度远高于EA组,并且在24h显示出最大值。组织中MPO的测定结果与肝脏组织髓过氧化物酶染色结果一致,在IR和NPA组中,可见大量中性粒细胞在缺血坏死区域浸润。结论:(1)小分子抑制剂SW033291可能在小鼠缺血再灌注损伤中起到一定缓解肝脏损伤的疗效;(2)电针足三里和阳陵泉穴可能在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中起到一定的保护作用。
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