论文部分内容阅读
卵巢癌是死亡率最高的妇科肿瘤。复发和化疗耐药是卵巢癌治疗中的一个难题。越来越多的证据显示癌症的发生和发展是由于一小部分癌症干细胞(CSCs)所引起。癌症干细胞也是肿瘤复发、转移和耐药的根源。现在的化疗模式可清除大部分肿瘤细胞，但不能清除那部分具有高度自我更新和修复能力的肿瘤干细胞。因此靶向肿瘤干细胞的治疗将是更加有效的治疗。包括上皮性卵巢癌在内的许多恶性肿瘤被证实存在肿瘤干细胞。
调节正常干细胞自我更新和分化的信号通路失调会导致干细胞的持续地异常地自我更新和增殖，并最终导致肿瘤的发生。Notch信号通路在干细胞的信号调节网络中起着重要的作用。Notch受体、配体结合后经一系列蛋白水解过程释放活性片段NICD，NICD转位至核内启动靶基因的转录。γ-分泌酶抑制剂可抑制Notch受体的水解及NICD的产生，从而阻断Notch信号。近些年来γ-分泌酶抑制剂的抗肿瘤效果在许多实验中得到证实。然而Notch信号及γ-分泌酶抑制剂对卵巢癌干细胞的作用尚未被阐明。
在本研究中，我们用干细胞选择培养法在卵巢癌细胞系H08910和SKOV3中富集卵巢癌干样细胞。这些细胞在无血清培养基中可悬浮生长形成细胞球，并过表达Oct4和Sox2蛋白。用γ-分泌酶抑制剂DAFT阻断Notch通路，研究Notch信号通路阻断对卵巢癌干样细胞自我更新和干性维持的影响。DAPT可显著抑制肿瘤细胞球的形成，减小细胞球的尺寸，减少细胞球的数量。MTT实验进一步证实了DAPT的抗自我更新、抗增殖作用。而且高浓度的DAPT可促进卵巢癌干样细胞凋亡。这些结果说明Notch信号在卵巢癌干细胞的自我更新中起着关键性作用，而且与细胞的生存力有关。
CD44、CD117、CD133为卵巢癌干细胞特异的表面标志分子。有研究表明：CD44+CD117+细胞是卵巢癌干细胞，CD133亦是卵巢癌干细胞的一个表面标志。γ-分泌酶抑制剂DAFT下调卵巢癌干样细胞这些特异的表面标志分子表达，说明γ-分泌酶抑制DAPT可减少肿瘤细胞群中肿瘤干细胞的数量。转录因子Oct4和Sox2在维持胚胎干细胞的多潜能性中起重要作用，并且参与调节肿瘤干细胞的自我更新、干性特征维持及化疗耐药。Western blot和Realtime定量RT-PCR实验证实：DAPT阻断Notch信号通路，减少NICD片段的产生及Notch靶基因HES1的转录及翻译，进而减少卵巢癌干样细胞Oct4、Sox2蛋白及mRNA的表达。Notch信号参与调节Oct4和Sox2基因的转录和翻译，在卵巢癌干细胞的干性维持中起重要作用。阻断Notch信号为有效的靶向卵巢癌肿瘤干细胞的治疗。本研究显示：Notch信号通路不仅在卵巢癌干细胞的自我更新和增殖中起重要作用，而且在卵巢癌干细胞的干性维持中起重要作用。Notch信号通路成分为卵巢癌治疗的有效靶点。γ-分泌酶抑制剂有望成为靶向卵巢癌干细胞的治疗药物。