产吲哚根际细菌对南方根结线虫侵染过程的影响

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植物寄生线虫目前已经成为仅次于真菌的第二大病害,其具有高度敏感的化学感受器,根结线虫感应并识别由植物根部或根际微生物释放的化学信号,利用化学感受器来定位寄主完成侵染过程。因此可以利用化感物质来干扰其寻找寄主的过程,达到防治根结线虫的目的。课题组在前期研究中发现南方根结线虫对吲哚具有趋化活性,并研究发现了南方根结线虫感知吲哚的信号通路,为了更深入研究吲哚在南方根结线虫侵染番茄根系过程中的作用,本论文拟通过干扰南方根结线虫感知吲哚的相关基因,研究细菌及其产物吲哚在南方根结线虫干扰前后侵染番茄根系过程中的影响。通过对菌株发酵液毒杀南方根结线虫和菌株产吲哚两方面活性的筛选,共筛选出五株进行双通盆栽实验的菌株。这五株菌主要分为三种:杀线虫产吲哚菌株BX(Proteusvulgaris BX)、B13(Enterobacterasburiae B13)和J-1(Bacilluspumilus J-1),杀线虫不产吲哚菌株1-50(Bacillussp.1-50)和不杀线虫产吲哚菌株OP50(Escherichia coli OP50)。同时,在前期研究的基础上,选择南方根结线虫(Meloidogyne incognita)基因Mi-odr-1和Mi-str-193 进行干扰,基因Mi-odr-1被干扰后线虫对吲哚的趋化能力下降,但对番茄根的趋化和侵染没有显著变化,因此选择干扰基因Mi-odr-1,作为盆栽实验的侵染线虫。利用干扰后的南方根结线虫和五株实验菌进行盆栽双通实验发现:接种野生型线虫,加入菌株OP50发酵液一侧的根结数比未加发酵液一侧的明显增加,根结数增加了 20.10%,而接种RNAi线虫,加入发酵液OP50一侧的根结数比未加发酵液一侧的相比没有显著性差异,说明吲哚在南方根结线虫侵染番茄过程中起到了吸引作用,能增加侵染率。加入杀线虫的四株菌,不管线虫是否被干扰,45天时与未加发酵液的LB组相比根结数都明显下降。并且菌株BX和B13组中未加发酵液一侧根结数要明显低于LB组,说明南方根结线虫明显趋向了加发酵液的一侧,但是加了发酵液一侧的根结数比未加发酵液的一侧少,说明虽然吲哚能够将线虫吸引过去,但是菌株的毒杀活性导致侵染下降。接种野生型线虫,加入BX和B13菌株发酵液后根结数分别减少10.68%、23.38%;接种RNAi线虫,加入BX和B13菌株发酵液后根结数分别减少19.85%、40.94%。而菌株J-1和1-50组中双通两侧根结数没有显著性差异。同时,文献报道许多吲哚衍生物在植物的生长和防御病虫害等方面具有重要作用。因此,在吲哚作用的基础上,本文进一步研究了四种吲哚衍生物(吲哚乙酸、吲哚丁酸、3-甲基吲哚和3-吲哚甲醛)对南方根结线虫的吸引活性,结果表明南方根结线虫对这四种化合物的趋化具有浓度依赖性,高浓度时排斥低浓度时吸引,趋化指数都达到0.2左右。在这些化合物的作用下,线虫AWC通路上的六个基因均明显上调。对这六个基因进行RNAi,干扰后南方根结线虫对吲哚乙酸、吲哚丁酸和3-甲基吲哚的趋化均明显下降,说明这些同源基因在感知这三种化合物的调控中起作用。但是基因Mi-str-193和Mi-daf-11在干扰后南方根结线虫对3-吲哚甲醛的趋化与对照相比没有显著性差异,说明这两个基因可能不参与南方根结线虫对3-吲哚甲醛的感知。结果表明吲哚乙酸、吲哚丁酸和吲哚甲基与吲哚有相似的感知通路。本论文以信号分子吲哚为研究对象,研究吲哚及产吲哚细菌在南方根结线虫线虫侵染番茄根系过程中的作用,说明菌株产生的吲哚能提高根际细菌对根结线虫的诱杀效率,具有防治根结线虫病的开发潜力,为根结线虫的生物防治提供新思路和防治策略。
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