右美托咪定通过抑制HCN离子通道减轻神经病理性疼痛的研究

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目的:  探讨右美托咪定对神经病理性疼痛的镇痛效果以及对脊髓背角、ACC、mPFC中HCN离子通道的表达的影响,为神经病理性疼痛的治疗提供一定的理论基础。  方法:  成年雄性C57小鼠72只,体重20-24g,随机分为6组,每组12只:①control组:空白对照组,不做手术操作相关处理;②Sham组:假手术组,分离小鼠左侧坐骨神经,绕线但是并不结扎;③CCI组:在坐骨神经主干部分结扎;④CCI+DEX组:CCI模型的制备并且给予右美托咪定的注射⑤CCI+ZD7288组:CCI模型建立并且给予HCN通道阻滞剂ZD7288的注射;⑥CCI+ZD7288+DEX组;CCI模型的制备并且给予右美托咪定以及ZD7288的注射。其中给药方式主要为:尾静脉注射、鞘内注射和侧脑室注射。  将各组小鼠的机械痛阈值和热痛阈值检测并记录,分别将小鼠的腰段脊髓, ACC和 mPFC区域取材并做免疫荧光及western-bloting检测脊髓腰骶膨大处、ACC和mPFC中HCN离子通道分布和表达的情况。  结果:  1.疼痛阈值(50%MWT和PWTL)的测定:Sham组与Sham组小鼠各时间段50%MWT和 PWTL阈值没有统计学差异(P>0.05);与 Sham组相比,CCI组小鼠50%MWT和 PWTL于术后第三天阈值明显降低(P<0.05),并可持续到术后的第21天;与CCI组相比,通过尾静脉、鞘内以及侧脑室分别注射DEX、ZD7288、ZD7288+DEX之后,50%MWT和PWTL均明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05)。  2.免疫荧光测定HCN通道的分布及表达:与Sham组相比,CCI模型组中脊髓、ACC、mPFC三个部位的HCN通道蛋白在术后第7天表达量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与CCI组相比,经尾静脉、鞘内以及侧脑室分别注射DEX、ZD7288、ZD7288+DEX之后,脊髓、ACC、mPFC三个部位的 HCN通道蛋白在术后第7天表达量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。  3. Western-bloting检测HCN通道的含量:在脊髓、ACC、mPFC三个部位中, CCI模型之后第3、7、14、21天HCN的表达量明显升高(P<0.05);经鞘内注射给药之后,脊髓中的HCN通道的表达量明显降低(P<0.05);尾静脉注射给药之后,脊髓、ACC、mPFC中的HCN的含量均明显降低(P<0.05);经侧脑室注射给药之后, ACC、mPFC中 HCN通道的含量均明显降低(P<0.05)。  结论:  1. CCI模型之后,机械痛和热痛阈值均明显降低  2.术后经尾静脉注射、鞘内注射以及侧脑室注射右美托咪定和 ZD7288,均可以产生不同程度的镇痛作用以及降低HCN的表达。  3.右美托咪定通过降低HCN通道蛋白的表达对神经病理性疼痛产生调节作用。
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