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研究背景:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是老年性痴呆最常见的原因,以进行性认知功能减退、行为和人格障碍等为主要临床特征。其病因和发病机制复杂,β-淀粉样蛋白(Aβ)在脑组织中的过度沉积及其神经毒性作用被认为是重要的发病机制之一,因此,有效地防止或减轻Aβ的神经毒作用成为防治AD的重要途径。Aβ包括完整肽链(Aβ1-40、Aβ1-42)、Aβ25-35和Aβ31-35片段在各种实验模型中均表现出对神经元的毒性作用,其中Aβ31-35被认为是Aβ的有效活性中心,被作为探讨和研究Aβ毒性作用的最小片段。Humanin(HN)是2001年在AD患者脑组织中发现的一种多肽类物质,离体实验证实,其能拮抗Aβ(Aβ1-40、Aβ1-42、Aβ25-35)及其它AD相关致病因子的毒性作用,发挥神经保护作用,但作用机制尚未阐明。我们前期的离体实验证实HN能够通过拮抗Aβ31-35诱导的培养大鼠皮层神经元的凋亡发挥其神经保护作用,在此基础上,本研究采用侧脑室注射Aβ31-35建立痴呆动物模型,在体进一步探讨HNG对Aβ31-35神经毒的效应作用,并对其作用机制进行初步探讨。第一部分:S14G-Humanin对Aβ31-35诱导的大鼠行为学及神经元凋亡的影响目的:在体观察HNG对Aβ31-35诱导的大鼠行为学及神经元凋亡的影响。方法:应用侧脑室注射聚集的Aβ31-35建立AD模型,同时侧脑室注射不同浓度的HNG,通过Morris水迷宫实验观察各组大鼠学习及记忆能力的改变;以神经元的凋亡为观察指标,应用TUNEL法检测各组海马神经元的凋亡情况,应用免疫组化法检测海马神经元caspase-3的表达。结果:1、Morris水迷宫检测大鼠学习及记忆能力:与正常对照组相比,Aβ31-35组大鼠的学习、记忆能力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ31-35组相比,Aβ31-35+HNG(0.01mmol/L)组大鼠的学习、记忆能力无明显改变(P>0.05),而Aβ31-35+HNG(0.1mmol/L、1mmol/L)组大鼠的学习、记忆能力明显改善,差异有统计学意义(P <0.05)。2、TUNEL染色:与对照组相比,Aβ31-35组海马神经元的凋亡指数明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ31-35组相比,Aβ31-35+HNG各组(0.01 mmol/L、0.1mmol/L、1mmol/L)的凋亡指数均显著下降(P<0.05),且随着HNG浓度的增加,凋亡指数逐渐减小,Aβ31-35+HNG各浓度组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。3、caspase-3免疫组化:与对照组相比,Aβ31-35组的caspase-3阳性细胞数增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ31-35组相比,Aβ31-35+HNG各组(0.01 mmol/L、0.1mmol/L、1mmol/L)caspase-3阳性细胞数减少(P<0.05),且随着HNG浓度的增加,caspase-3阳性细胞数逐渐减少,Aβ31-35+HNG各浓度组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。第二部分:S14G-Humanin拮抗Aβ31-35神经毒的机制探讨目的:以小胶质细胞形态和功能的改变为观察指标,探究炎症反应在HNG神经保护功能中的作用。方法:应用侧脑室注射聚集的Aβ31-35建立AD模型,同时侧脑室注射不同浓度的HNG,以小胶质细胞形态和功能的改变为观察指标,运用免疫组化法检测海马及皮层CD11b免疫阳性的激活小胶质细胞的数量,采用ELISA法检测大鼠海马及皮层组织IL-6的含量。结果:1、海马及皮层CD11b免疫阳性小胶质细胞的检测:与正常对照组相比,Aβ31-35组的CD11b免疫阳性的激活小胶质细胞在皮层及海马组织中均增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ31-35组相比,Aβ31-35+HNG各组(0.01 mmol/L、0.1mmol/L、1mmol/L)皮层及海马的CD11b免疫阳性的激活小胶质细胞减少(P<0.05),且随着HNG浓度的增加,CD11b免疫阳性的激活小胶质细胞逐渐减少,Aβ31-35+HNG各浓度组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。2、海马及皮层IL-6的含量检测:与正常对照组相比,Aβ31-35组的IL-6的含量在皮层及海马组织中均增加,差异有统计学意义(P<0.05);与Aβ31-35组相比,Aβ31-35+HNG各组(0.01 mmol/L、0.1mmol/L、1mmol/L)皮层及海马IL-6的含量减少(P<0.05),且随着HNG浓度的增加,IL-6的含量逐渐减少,Aβ31-35+HNG各浓度组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1.HNG具有拮抗Aβ31-35致大鼠学习、记忆障碍及神经元凋亡的作用。2.HNG抑制Aβ31-35诱导的小胶质细胞激活产生的炎症反应可能是HNG拮抗Aβ神经毒的机理之一。