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目的：膀胱癌(Bladder cancer)是泌尿系统最常见的肿瘤之一,其中大部分的癌细胞来自膀胱内面黏膜表皮,即移形上皮细胞癌(TCC),以浸润的方式生长,复发率为50%-70%。虽然近年来膀胱癌的治疗取得一些进展,但是目前尚无有效治疗药物。来源于天然产物的抗肿瘤药物是近年来肿瘤药物研发中的热点,如紫杉醇等多种一线临床抗肿瘤药物来源天然产物。石斛是传统中药材,现代药理学研究表明石斛具有抗肿瘤活性、抗衰老、增强机体免疫力、扩张血管以及抗血小板凝集等多种效能,特别是其抗肿瘤活性日益受到广泛关注。本文主要探讨石斛活性化合物毛兰素对人膀胱癌细胞的抗癌活性及其分子机制。方法：运用细胞增殖MTT法,检测不同浓度的毛兰素给药EJ细胞48h后对细胞增殖的抑制作用,并计算出半数抑制浓度IC50；采用形态学观察结合DAPI染色检测毛兰素对EJ细胞凋亡形态的影响；细胞周期流式分析毛兰素对细胞周期分布的影响；通过Western blot检测毛兰素对细胞凋亡下游相关蛋白PARP, Caspase3/7的影响,重点考查毛兰素对细胞凋亡线粒体通路中Bcl-2抗凋亡蛋白以及促凋亡蛋白家族表达的影响,通过RNAi技术敲除Bim的表达或者构建Bcl-2表达质粒过量表达Bcl-2,在分子水平上探讨Bim和Bcl-2在毛兰素诱导细胞凋亡过程中的重要作用；此外,Western blot检测细胞应激SAPK/JNK激酶通路在毛兰素诱导的细胞凋亡中的分子信号事件,通过使用c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂sp600125以及c-Jun的显性负突变TAM67,进一步确证JNK信号通路在毛兰素抗肿瘤活性中的调控作用。结果：MTT实验结果表明毛兰素能显著抑制膀胱癌EJ等细胞的增殖,且抑制作用呈剂量依赖效应,毛兰素给药48h后其半数抑制浓度为65.04nmol/L (P<0.05);细胞形态观察发现毛兰素能够显著降低细胞的存活率,细胞体积缩小、变圆,与周围细胞脱离,DAPI染色后清晰地观察到细胞核内染色质的固缩与断裂,呈现出典型的细胞凋亡形态学特征；细胞周期流式分析发现当毛兰素浓度分为78.5nmol/L和157.1nmol/L时,其G2/M的细胞数量相应地达到了32.05%和59.73%(P<0.05),而空白对照只有18.68%(P<0.05),表明毛兰素能明显阻滞细胞周期于G2/M期；Western blot实验结果表明毛兰素能够引起Bim的上调,Bcl-2、Mcl-1和Bcl-xL的下调,通过触发Caspase的级联反应,触发PARP的断裂,进而诱导细胞凋亡。通过Bim的敲除或Bcl-2的超量表达,进一步证实Bim以及Bcl-2在毛兰素诱导细胞凋亡中的重要作用。此外,毛兰素能够激活SAPK/JNK信号通路,引起JNK、c-Jun和Bcl-2的磷酸化。JNK抑制剂sp600125或c-Jun显性负突变则大大削弱了毛兰素对膀胱癌细胞的增殖抑制作用,从而进一步证实JNK通路介导毛兰素诱导细胞凋亡过程中的重要调控作用。结论：毛兰素能显著抑制EJ细胞的增殖,诱导细胞凋亡,同时阻滞细胞周期于G2/M期。此外,毛兰素上调Bim的表达,下调Bcl-2和Mcl-1的表达,激活Caspase级联反应,最终触发PARP断裂从而诱导细胞凋亡。最后,毛兰素通过激活SAPK/JNK通路调控细胞凋亡信号通路。