[目的]以酪氨酸激酶为靶点的小分子化学靶向药物(Tyrosine Kinase Inhibitor, TKI)在临床肿瘤治疗中取得良好的抗肿瘤效应,然而内源性或获得性耐药仍是目前临床肿瘤靶向治疗中急需解决的问题。免疫治疗是一种调动机体自体免疫效应细胞杀伤肿瘤的方法,具有特异性及记忆性,能够产生持久的抗肿瘤效应。研究表明,TKI靶向治疗联合免疫治疗能够产生协同抗肿瘤效应。EML4-ALK是Soda等于2007年在NSCLC中发现的由棘皮动物微管相关蛋白样4基因(Echionderm Microtubule-associated Protein-Like4,EML4)和间变性淋巴瘤激酶基因(Anaplastic Lymphoma Kinase,ALK)在2号染色体短臂颠倒而形成的融合基因。EML4-ALK融合基因的细胞系或EML4-ALK转基因小鼠体内肺癌的形成表现为癌基因依赖性,ALK激酶抑制剂能够有效抑制此类肺癌的生长。克卓替尼(Crizotinib)作为第一代ALK抑制剂在临床实验中获得很好的疗效,Ⅱ期临床实验患者整体应答率达到了近60%,Ⅱ期和Ⅲ期临床试验得到的PFS和ORR。很多TKI所阻断的信号通路在淋巴细胞激活、增殖及效应功能中也发挥重要作用,因此,作为以ALK为靶点的抑制剂克卓替尼与免疫治疗联合应用的前提,有必要考察克卓替尼对人淋巴细胞的效应。[方法]本研究利用来自3例健康对照及3例EML4-ALK融合基因阳性NSCLC患者PBMCs (外周血单个核细胞,Peripheral Blood Mononuclear Cells),在生理浓度范围内(包括体内平均药物浓度和体内药物最大浓度),在体外考察克卓替尼对静止或增殖的PBMCs效应的研究,包括检测细胞活性、BrdU检测细胞增殖、流式细胞计数检测细胞凋亡和周期、ELISA等检测细胞免疫功能的效应,以期为联合治疗提供理论基础。[结果]我们首先发现人PBMCs表达ALK,经过CD3、CD28抗体激活后有ALK激酶域发生磷酸化使p-ALK得以表达,并且能够被一定浓度的克卓替尼所抑制；静止期和增殖期的PBMCs对克卓替尼不敏感,体内平均维持浓度的克卓替尼不会明显影响PBMCs的活性；不会诱导静止期PBMCs和增殖期PBMCs的凋亡；不会明显引起增殖PBMCs细胞周期的改变；不会影响PBMCs的增殖分裂能力；不会减少分泌IFN-γ的CD8+细胞所占总的CD8+细胞的比例；也不会影响CD8+细胞分泌IFN-γ的能力。体内最大浓度的克卓替尼对PBMCs活性的影响较小；静止期PBMCs凋亡没有影响,但能明显引起增殖期PBMCs的凋亡；能明显使PBMCs的细胞周期向G0/G1期转变；能对PBMCs的增殖影响较小；体内最大浓度的克卓替尼对CD8+IFN-γ+/CD8+的百分比影响较小,但是能够明显抑制CD8+细胞分泌IFN-γ。[结论]目前临床使用的ALK抑制剂克卓替尼对人淋巴细胞生存、增殖及免疫效应功能影响有限,可以初步判定克卓替尼适合与免疫治疗联合用于治疗ALK阳性肺癌。为了得到更能准确指导临床用药的结论,在后续的实验中,会进一步考察克卓替尼对患者实际的影响。