【摘 要】
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目的:本研究通过足底注射完全弗氏佐剂（Complete Freund’s adjuvant,CFA）建立炎性疼痛模型,探究脊髓脆性X智力低下蛋白（Fragile X mental retardation protein,FMRP）在炎性疼痛发生发展中的作用及其可能机制。方法:1.探究CFA后大鼠脊髓背角FMRP,TNF-α及IL-6的表达变化及细胞定位。采用随机数字表法将大鼠分为三组:Naive组
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目的:本研究通过足底注射完全弗氏佐剂（Complete Freund’s adjuvant,CFA）建立炎性疼痛模型,探究脊髓脆性X智力低下蛋白（Fragile X mental retardation protein,FMRP）在炎性疼痛发生发展中的作用及其可能机制。方法:1.探究CFA后大鼠脊髓背角FMRP,TNF-α及IL-6的表达变化及细胞定位。采用随机数字表法将大鼠分为三组:Naive组,Sham组以及CFA组。在CFA后第三天,检测大鼠机械刺激缩足反射阈值及热辐射缩足反射潜伏期。痛阈测定后,取下大鼠脊髓腰膨大处脊髓背角,用于下述实验。利用蛋白质印迹技术检测脊髓背角FMRP表达水平（n=4/组）;利用酶联免疫吸附法测定脊髓背角肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）及白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）的表达水平（n=4-5/组）;利用免疫荧光技术探究CFA大鼠脊髓背角FMRP,TNF-α及IL-6的细胞定位及共标情况（n=4-5/组）。2.探究脊髓背角FMRP在CFA诱导的炎性疼痛中的作用及具体机制。Sprague-Dawley大鼠先进行鞘内置管,5天后（D0）采用随机数字表法将大鼠分为三组:Sham+PEI组,CFA+si RNA组和CFA+PEI组。在CFA造模当天及造模后第1,2天,连续鞘内给予脆性X智力低下基因1（Fragile X mental retardation 1,Fmr1）小干扰RNA（Small interfering RNA,si RNA）6μg/12μl或in vivo-jet PEI 12ul;同时在CFA造模当天（D0）及造模后第1（D1）,2（D2）,3（D3）天鞘内注射前检测大鼠机械刺激缩足反射阈值及热辐射缩足反射潜伏期。在D3痛阈测定后,取下大鼠脊髓腰膨大处脊髓背角,利用蛋白质印迹技术检测脊髓背角FMRP表达水平变化（n=4/组）;利用酶联免疫吸附法测定脊髓背角TNF-α及IL-6的表达水平（n=4-5/组）。结果:与Naive组及Sham组相比,CFA组造模3天后机械刺激缩足反射阈值及热辐射缩足反射潜伏期均明显下降;同时,CFA组大鼠脊髓背角FMRP、TNF-α及IL-6的表达水平显著增高。免疫荧光双染结果显示,CFA组大鼠脊髓背角FMRP主要与神经元共标,并与TNF-α及IL-6共标。与CFA+PEI组相比,CFA+si RNA组大鼠在鞘内连续给予Fmr1 si RNA 3天后,脊髓背角FMRP表达水平明显降低;且机械刺激缩足反射阈值从D2开始明显增高,并持续至D3;而热辐射缩足反射潜伏期从D1开始明显增高,并持续至D3。同时,CFA+si RNA组脊髓背角TNF-α及IL-6表达水平也在D3显著下降。结论:我们的研究结果表明,脊髓背角FMRP通过调节TNF-α和IL-6的表达,参与了CFA诱导的炎症疼痛。
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