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目的:在帕金森病(Parkinson disease,PD)等常见的神经退行性疾病中,小胶质细胞激活诱导神经元的变性凋亡是重要的发病机理。抑制小胶质细胞激活,减轻神经炎症的发生,探索控制神经炎症反应的新靶点,一直以来是延缓PD等神经退行性疾病的发生和早期治疗关注的热点。植酸(Phytic acid,PA)作为一种广泛分布于动植物细胞组织中的天然活性物质,具有多种抗氧化、抗炎症反应等多种生理功能,在本课题组前期研究发现其在帕金森病动物模型中表现出显著地神经保护作用,而且与其抗炎作用有关,但具体机制未作深入研究。本项目采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活BV2小胶质细胞来构建神经炎症模型,并观察不同浓度植酸对脂多糖激活的小胶质细胞炎症反应的抑制作用及相关机制,探讨植酸作为神经保护药物的靶点和依据。方法:体外培养BV2小胶质细胞,脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导BV2小胶质细胞激活,建立细胞炎症模型,分为空白对照组、LPS组、PA组、LPS+PA组。(1)MTT法检测不同浓度的PA、LPS对BV2小胶质细胞存活率的影响。(2)免疫荧光染色法特异性标记小胶质细胞标记物Iba1,激光共聚焦显微镜下观察BV2小胶质细胞形态学改变。(3)构建划痕迁移模型,检测PA对激活的小胶质细胞转移能力的影响。(4)ELISA实验检测iNOS的活性,Griess法检测炎症因子NO的释放量。(5)荧光实时PCR(RT-qPCR)、ELISA实验检测炎症因子IL-6、TNF-α的表达与释放。(6)Western blot实验检测核NF-κB p65蛋白表达量。(7)荧光实时PCR和Western blot检测核蛋白体调节蛋白1(RRS1)的表达。结果:(1)MTT实验结果表明,不同浓度梯度的PA对细胞存活率无显著影响;炎症造模试剂脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对细胞存活率并无显著影响。(2)Iba1荧光染色结果显示,PA明显改善了LPS激活后的BV2小胶质细胞形态。(3)划痕实验显示PA显著抑制了激活细胞的转移能力。(4)ELISA、Griess实验显示,PA给药预处理后,与LPS损伤组相比细胞iNOS活性和NO的释放显著降低(P<0.05),并呈现剂量依赖性降低。(5)实时荧光定量PCR和ELISA结果显示,PA给药预处理后,与LPS损伤组相比炎症因子IL-6、TNF-α的表达与释放显著降低(P<0.05)。(6)WB结果显示,与LPS激活组相比,给药后PA显著抑制了核NF-κB p65的表达(P<0.05)。(7)荧光实时PCR和Western blot结果表明,RRS1在LPS刺激后mRNA和蛋白水平表达增加,给药后PA抑制了RRS1在BV2小胶质细胞中的异常表达(P<0.01)。结论:植酸(Phytic acid,PA)能够抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞的激活,抑制iNOS活性以及NO的生成,并且有效地抑制炎症因子TNF-α、IL-6的释放,其机制与其抑制NF-κB介导的相关信号途径及核蛋白体组装RRS1相关。