背景与目的癫痫是大脑神经元异常同步放电引起的反复性、发作性、暂时性的慢性脑功能障碍性疾病,是严重危害人类健康的神经系统常见慢性疾病之一。70%的癫痫病人经过正规抗癫痫治疗后可以完全控制甚至治愈,但是仍有30%病人经过正规药物治疗后仍反复发作而成为难治性癫痫。癫痫的反复发作可以导致脑损伤,造成患儿神经精神发育迟滞甚至倒退,给患者、家庭和社会带来了沉重的负担。因此,研究癫痫的发病机制,发现癫痫发作的关键环节,开发针对性的药物,是寻求癫痫新治疗方法的途径。目前从难治性癫痫病人的脑组织病理学,癫痫动物模型的脑组织中以及癫痫病人的脑脊液、血液中均发现癫痫发作与免疫、炎症密切相关,癫痫发作可以导致炎性因子释放,炎性因子又可以降低癫痫发作的阈值,因此深入研究炎症因子在癫痫发生、发展中的作用,为寻找癫痫治疗新的靶点有重要意义。高迁移率族蛋白1(high-mobility-group-box protein 1,HMGB1)是存在于真核生物细胞内的一类非组蛋白染色体结合蛋白,广泛存在于淋巴组织、脑、肝、心、脾、肾等组织细胞中,主要存在于胞核。研究显示巨噬细胞、单核细胞、垂体细胞等受内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等诱导后,HMGB1可分泌到细胞外。可激活细胞表面的Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4),通过髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)依赖信号通道一系列反应最终导致κ基因核结合因子(nuclear factor-κ-gene binding,NF-κB)进入细胞核发挥转录调控作用,激活白介素1(Interleukin 1,IL-1)、白介素6(Interleukin 6,IL-6)、白介素12(Interleukin12,IL-12)、TNF-α、及干扰素-γ(Interferon-γ,INF-γ)等细胞因子的基因表达引起炎症反应。研究证实HMGB1参与了脑缺血、脑损伤、颅内感染、败血症、胰腺炎、呼吸系统感染等疾病病理过程,给予HMGB1抗体可以减轻这些疾病引起的炎症反应,而相反给予重组HMGB1可以加重炎症反应。IL-2是由活化的CD4+T细胞和CD8+T细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子,是所有T细胞亚群的生长因子,可促进活化B细胞增殖,故为调控免疫应答的重要因子。IL-6也是一种具有多种生物活性的细胞因子,可以诱导B细胞、单核细胞分化、诱导IL-2和IL-2受体表达等,在免疫反应中也起至关重要的作用。在遗传性声源性癫痫小鼠脑室内注射重组IL-2,使得声音导致癫痫发作的潜伏期缩短,阈值降低,每次放电和行为发作的时间延长。使用IL-2抗体及其受体的抗体可明显降低化学致痫剂和声音所致癫痫发作,以上说明细胞因子IL-2、IL-6可能参与了癫痫发生发展过程。综上所述,HMGB1、IL-2、IL-6作为重要的免疫、炎症因子,在癫痫的发病过程有重要作用,但是在儿童癫痫中研究不多,为此本研究对癫痫儿童近期发作后血清HMGB1、IL-2、IL-6浓度进行检测,探讨与其临床发作的关系。方法研究对象为我院儿科病房2013.11月-2014年8月收住院的6月~12岁癫痫儿童85例。依据2010年国际抗癫痫联盟(ILAE)及国际癫痫局(IBE)制定的癫痫发作和癫痫综合征诊断指南进行分类,结合临床表现、既往史及个人史、家族史、脑电图及脑MRI而确诊为原发性癫痫;排除中枢神经系统感染、颅脑创伤、脑梗塞、脑出血、脑部占位或遗传代谢性疾病引起的继发性癫痫,并排除服用激素、免疫抑制剂及近期感染者。据癫痫发作的频率及每次持续时间进行分组,本研究将癫痫发作每天>3次定义为癫痫频发组;发作持续30分钟以上或短期内连续间断发作超过30分钟,但是间歇期没有恢复到发作前状态者定为癫痫持续状态组。据此85例癫痫儿童分为癫痫1组(频发)20例;癫痫2组(持续状态)16例;癫痫3组(非频发或持续状态)49例,男女比例分别为12/8、10/6、29/20。各组病人年龄、性别、病程、发作类型无明显差别(P>0.05)。癫痫病人在癫痫发作后12h内采集空腹外周静脉血2ml,然后室温下静置30min,离心20min(离心半径15cm,3000r/min),留取血清,-80℃冰箱保存。正常对照组标本采集处理同上,批量操作检测。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)测定血清IL-2、IL-6、HMGB-1水平,操作方法严格按说明书进行。用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值);以标准品的浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制标准曲线,根据OD值带入标准曲线拟合方程式,计算待测样品浓度,结果以ng/L或ng/ml表示。所有数据统计方法均应用SPSS17.0软件处理,观察不同癫痫组之间、癫痫组与正常对照组之间儿童血清中IL-2、IL-6、HMGB1水平变化及其相关性。结果:IL-2在癫痫组中水平明显高于正常对照组水平,这种变化同样见于IL-6、HMGB1中,即癫痫频发、癫痫持续状态组、非癫痫频发或持续状态组与正常组对比HMGB1、IL-2、IL-6水平有明显差异。进一步通过LSD法进行多组之间两两比较后可见癫痫频发组、癫痫持续状态组水平较非癫痫频发或癫痫持续状态组IL-2水平高(P<0.05),且癫痫频发组、癫痫持续状态两组之间IL-2水平有明显差异(P<0.05)。癫痫频发组、癫痫持续状态组较非癫痫频发或癫痫持续状态组中IL-6、HMGB1水平高(P<0.05),但癫痫频发组、癫痫持续状态组两组之间HMGB1、IL-6水平对比无明显统计学意义(P>0.05)。另外本实验中不同癫痫发作类型、有无应用抗癫痫药物患儿血清中HMGB1、IL-2、IL-6水平无明显差异(见表1、表2,P>0.05)。血清中IL-6与HMGB1水平有显著相关性,以HMGB1水平为X轴,IL-6水平为Y轴做散点图分析,可见两者呈正相关的线性关系,进一步做Spearman秩相关分析,两者相关系数r2=0.577,P=0.000。血清中IL-2、HMGB1水平有显著相关性,散点图可见两者呈正相关线性关系,行Spearman秩相关分析,两者相关系数r2=0.59,P=0.000。结论:1.癫痫发作时炎症反应程度与癫痫发作的严重程度可能存在正相关。2.HMGB1作为促炎因子可能在癫痫发作发展过程中通过调节IL-2、IL-6等炎症因子的释放启动、维持及放大炎症反应,因此HMGB1抑制剂可能有利于癫痫的控制,为难治性癫痫寻求新的治疗靶点。