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目的 肝癌是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。因此，揭示导致肝癌无限增殖和信号调控的内在机制，具有十分重要的理论意义。大量证据表明，癌症是一种凋亡失控性疾病，是内源性血管生成抑制剂和促进剂在肿瘤组织中局部浓度失平衡的结果，而最重要的血管生成促进剂是碱性成纤维细胞因子（bFGF）和血管内皮生长因子（VEGF）。其作用机制有多种说法，但都不十分明确，如与磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B（PI3K／PKB）信号转导通路有关。 bFGF是成纤维细胞生长因子（FGF）超家族中的重要成员，在体内分布广泛。参与了胚胎发育、血管形成、损伤修复、神经再生、肿瘤生长、细胞凋亡等多项生理及病理过程。bFGF的许多生理功能与酪氨酸蛋白激酶受体活性及丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）有关。 PKB又称Akt，是一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。PKB第308位苏氨酸和第473位丝氨酸磷酸化是其在体内的活性形式。生长因子激活的PI3K能够磷酸化不同的底物，产生相应的产物：磷脂酰肌醇3磷酸（PtdIns-3-P）、磷脂酰肌醇-3，4，二磷酸（PIP2）以及磷脂酰肌醇-3，4，5三磷酸（PIP3）。PIP2及PIP3两者独立地受数种不同的激酶和磷酸酶的调控。PIP3能够与一些蛋白的SH2和PH区域相互作用，对体内PKB／Akt活性调节有两种方式。活化的PKB从细胞浆转到细胞核内，刺激与增殖有关的基因转录及蛋白质合成等，发挥其在细胞增殖调控中的作用。 细胞凋亡是基因调控下的细胞自杀行为。细胞凋亡过程受凋亡促进因子P53、Fas等和凋亡抑制因子如bel、CAP家族、Survivin等的共同调节。Survivin是迄今发现最强的凋亡抑制因子。survivin序列包含三个PKC活性位点、两个酪氨酸蛋白激酶位点和一个PKA位点。这些残基在蛋白活性和凋亡调节中的作用尚不清楚。Survivin基因中CDECHR盒介导了基因的细胞周期依赖性表达。Survivin直接作用于Caspase，阻断细胞的凋亡过程。 本研究的目的就是通过bFGF刺激培养的人肝癌细胞株Bel-7402，并通过PI3K抑制剂wo咖annin阻断PKB的信号转导通路，以观察凋亡抑制蛋白Survivin mRNA的变化。证实Survivin的表达依赖于PI3称PKB信号转导通路，从而为SLirvivin的信号转导通路的研究奠定理论基础，并为肿瘤的治疗提供一种新的策略。方法 本实验应用培养的人肝癌细胞株Bel一402，检测bFGF及wortlnauni。作用后，Bel一402细胞的凋亡情况及Sulvivin信号转导机制。将细胞分组后，对细胞施加处理因素，收集实验及对照组细胞，分别用westem blot方法检测Bel一402中PKB活性的变化、用流式细胞术检测细胞增殖和凋亡的变化、RT一PCR检测survivin mRNA的表达情况。结果 随着bFGF浓度的升高，PKB的活性明显升高，当bFGF浓度为25n群耐时，PKB的活性达到峰值;以25n扩ml bFGF与Bel刀402细胞共同孵育5、10、30、6Omin。胞液的PKB活性5而n时开始升高，为对照组的1 .82倍。bFGF作用romin时，胞液的PKB活性升高最明显，为对照组的2.81倍（P<0.05），其后PKB活性开始下降，60min时降至对照组的1 .23倍。 RT一PCR显示，随着bFGF作用时间的延长，stirvivin mRNA的表达水平明显升高，10n扩nil bFGF作用时间为16h时，sivin mRNA的表达水平达到峰值，为对照组的7.86倍（P<0.05）。 加人抑制剂wortmannin后，PKB的活性和survivin mRNA的表达水平明显受抑制（P<0.05），其抑制程度与wortmannin浓度剂量有关系。表明PI3K抑制剂wo咖annin能阻断bFGF对PKB的活性和survivin mRNA的表达水平的促进作用，PKB途径是影响bFGF对细胞survivin mRNA的表达水平的通路之一。 流式细胞术分析，Bel-7402细胞经bFGF孵育后，与对照组比Gl期细胞减少，S期细胞增多，但wortmannin能抑制此增殖作用，wortlnannin处理后可见明显的亚二倍体峰，同时伴有二倍体峰及四倍体峰的下降，细胞凋亡百分率逐可达50%，survivin mRNA的表达水平降低，survivin mRNA的表达水平在16h明显减少，与对照组相比下降了64%。结论 1.bFGF能通过PKB途径迅速激活Bel一402细胞的PKB活性; 2.肝癌细胞经bFGF处理后Survivin mRNA的表达水平上调; 3.PI3K抑制剂wortmannin能够抑制bFGF对肝癌细胞s二ivin mRNA的表达水平的促进作用; 4.bFGF促进增殖，抑制凋亡，但wortmannin能抑制此促进作用，促进凋亡，导致survivin mRNA表达的下调。