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第一部分:不同浓度PgLPS对HEK-293细胞增殖与缺氧诱导因子-1α及ICAM-1表达的研究。背景:牙周炎是一种由口腔微生物感染引起的,以支持牙列的结缔组织和牙槽骨为目标的慢性感染性疾病。其通常会导致牙周软组织炎症、结合上皮根方增殖、进行性附着丧失及牙槽骨的吸收,使牙齿逐渐松动脱落,引起牙列缺损甚至牙列缺失。与此同时,牙周炎与多个全身系统性疾病关系密切,如不良妊娠结局、糖尿病、心血管疾病等。动脉粥样硬化是发生率最高的心血管疾病之一,其基本的病理变化是在主动脉内膜表层产生斑块。较为严重的动脉粥样硬化可使动脉血管钙化,形成血栓和血管溃疡,危急生命健康。HIF-1α作为一种在缺氧条件下可发挥生物活性的唯一特异性转录因子,在调控个体基因表达以维持氧稳态方面起着关键作用。在低氧微环境下,HIF-1α参与了牙周炎和动脉粥样硬化的发生发展过程。ICAM-1作为在动脉粥样硬化中具有重要作用的细胞因子,其表达上调与动脉粥样硬化的发生、发展过程密切相关。目的:本实验拟通过使用不同浓度牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激HEK-293细胞,探究其对HEK-293细胞增殖与HIF-1α及ICAM-1表达的影响。方法:利用不同浓度（0μg/m L、10μg/m L、20μg/m L、40μg/m L、80μg/m L）PgLPS刺激HEK-293细胞,用细胞增殖检测试剂盒（CCK8）检测PgLPS对细胞增殖影响,用蛋白免疫印迹法（Western Blot）和实时荧光定量PCR（real-time PCR）法检测HIF-1α蛋白及m RNA表达情况,用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细ICAM-1表达情况。结果:在较高浓度PgLPS（10μg/m L以上）刺激48h时,HEK-293细胞增殖能力可受到抑制（P＜0.05）。蛋白免疫印迹法显示在不同浓度PgLPS刺激下,HEK-293细胞HIF-1α的蛋白表达水平与对照组（0μg/m L）有较为明显的差异（P＜0.05）,且在40μg/m L PgLPS刺激下,HIF-1α的蛋白表达水平最高。Real-time PCR显示在不同浓度PgLPS刺激下,HEK-293细胞HIF-1α的m RNA表达无明显变化（P＞0.05）。酶联免疫吸附试验（ELISA）结果显示在不同浓度PgLPS刺激下,HEK-293细胞ICAM-1表达量与对照组（0μg/m L）有较为明显的差异（P＜0.05）,且较低剂量组（10μg/m L、20μg/m L）ICAM-1表达量低于较高剂量组（40μg/m L、80μg/m L）（P＜0.05）。结论:PgLPS可以抑制HEK-293细胞增殖,且能促进HEK-293细胞HIF-1α和ICAM-1的表达。第二部分PgLPS对HIF-1α敲除HEK-293细胞ICAM-1蛋白表达影响背景:在前期研究中,我们发现牙龈卟啉单胞菌脂多糖能促进HEK-293细胞HIF-1α及ICAM-1表达。作为牙龈卟啉单胞菌的主要毒力因子之一,脂多糖是牙龈卟啉单胞菌能够导致牙周炎发生发展的关键因素。由于其能作用于多种细胞因子,为了更为精确的探究牙龈卟啉单胞菌脂多糖对HIF-1α和ICAM-1两者的影响,我们需要特异性地降低HIF-1α的表达。CRISPR/Cas9技术作为新一代的基因编辑技术,其具有广泛的应用范围、基因编辑效率以及精度高等特点,已被应用在医疗、农业、食品工业等各个领域。目的:使用CRISPR/Cas9技术,构建HIF-1α敲除HEK-293细胞,并通过使用不同浓度PgLPS刺激HIF-1α敲除HEK-293细胞和野生型HEK-293细胞,两者之间比较ICAM-1的表达情况。方法:根据人源HIF-1α基因组序列,设计特异性靶点,根据设计结果合成HIF-1α敲除重组质粒,将其转染至细胞内。使用嘌呤霉素筛选后,通过T7 Endonuclease I酶切和蛋白印迹实验验证,从而获得HIF-1α敲除HEK-293多克隆细胞株。利用不同浓度（10μg/m L、20μg/m L、40μg/m L、80μg/m L）PgLPS刺激HIF-1α敲除HEK-293多克隆细胞株和野生型HEK-293细胞,用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测ICAM-1表达情况。结果:利用CRISPR/Cas9技术可以构建HIF-1α敲除HEK-293细胞。在不同浓度PgLPS刺激下,HIF-1α敲除HEK-293多克隆细胞ICAM-1蛋白表达量与野生型HEK-293细胞相比均降低（P＜0.05）。结论:HIF-1α基因敲除可降低由PgLPS引起的HEK-293细胞ICAM-1的表达。第三部分牙周手术在口腔治疗中的应用背景:牙周手术是口腔治疗过程中重要的组成部分,在特定情况下,单纯的药物或保守治疗已无法达到预期的治疗目标,需要通过外科手段进行辅助。常用于已无法通过牙周基础治疗取得良好效果的严重牙周炎。然而在临床上,除了用于治疗牙周疾病,许多病例也可应用牙周手术辅助治疗,从而取得令人满意的治疗效果。目的:探究牙周手术在口腔治疗中的应用效果。方法:本研究为病例系列研究,研究对象为符合牙周手术治疗适应证的患者,排除禁忌症,根据个体情况接受不同术式的牙周手术,用以辅助口腔疾病的治疗,观察实际治疗效果。所有患者均需完成相关检查,并在手术前接受牙周基础治疗。结果:本研究共选取病例5例,患者手术部位软硬组织恢复情况良好,术后复查均无疼痛、咬物不适等主诉症状。结论:在满足适应证的情况下,应用牙周手术辅助口腔疾病治疗可取得较好的治疗效果。