灵芝(Ganoderma lucidum)早在2000多年前已经在我国开始作为天然的补品,是一种进贡给帝皇的灵药,是吉祥如意的象征,同时具有非常重要的药用价值,例如:抗肿瘤,保肝、提高免疫力、抗HIV等等,而目前的许多研究结果表明起到这些作用的主要有效成分是灵芝中的三萜类化合物和多糖。目前工业产品中主要是通过水提法来获得这两种有效成分,但是这并不能最好的提取出灵芝中的有效成分。同时如何通过诱导物进行人工诱导的方式来提升灵芝的品质也成为十分重要的研究方向。本文主要对以下几个部分进行了研究。1.比较了灵芝不同种(赤芝、紫芝、松杉灵芝)和同种(赤芝)不同菌株间在生长管和大试管中的生长速度差异,其中生长管生长非常快的是黄二、H、Q菌株,而松杉灵芝和紫芝的生长速度很慢;在大试管中AL、102、Q、龙泉菌株的生长速度最快,紫芝和松杉灵芝的生长速度依然非常缓慢。生长管和大试管中的生长速度间没有相关性。比较了这些品种菌丝在平皿中生长的主要特征,并发现了它们在液体发酵后期时发酵液呈现出的不同状态:包括液体状、粘稠状、果冻状,发现在生长管中生长速度最快的菌株,其发酵状态为果冻状,生长速度居中的发酵状态为粘稠状,生长速度最慢的其状态为液体菌丝球。2.比较了不同灵芝在液体发酵时胞内和胞外多糖的含量的差异,结果表明H菌株菌丝中的多糖含量最高,在发酵液中的两株松杉灵芝MH、KL及一株赤芝S-1的多糖含量却非常的高,而它们在大试管和生长管中的生长速度却非常的慢,我们推测生长速度越慢的菌株,其液体发酵时胞外的多糖含量越高。3.通过测定不同灵芝原基多糖的含量,木文发现在原基中102、0012、Q菌株中的多糖含量非常的高。102号菌株在发酵菌丝和发酵液中的多糖含量都非常的低。通过对比子实体、原基和发酵菌丝的多糖含量,结果表明除了 H菌株,其他所有菌株在原基中的多糖含量都高于发酵菌丝体和子实体。4.本研究还测定了发酵菌丝、原基和子实体中的三萜的含量,在原基中S、JCL、0012、AL菌株中的三萜的含量都非常的高。取几种子实体长势较好的菌株,测定了它们的三萜含量,与原基及发酵菌丝中的三萜含量对比发现,子实体中的三萜含量>发酵菌丝体>原基,其中AL菌株的子实体三萜含量最高达到了 2.57%,从中总结出102、AL菌株不但生长速度较快,且子实体中的三萜含量都比较高。5.本文通过先热水浸提原基多糖,再对其残渣提取三萜和先提取原基三萜,再对其残渣提取多糖两种方式综合比较两种方法下的三萜和多糖的得率。结果显示先用热水浸提多糖后,再对残渣提取三萜,所得的三萜能达到直接醇提法的94.15%,甚至某些菌株还会超过直接醇提的方法。而先醇提三萜,再对残渣提取多糖,所得的多糖得率是直接热水浸提法的67.49%。本文认为先热水浸提多糖再对残渣提取三萜可以最大化的提取出三萜和多糖,提高灵芝营养价值的利用率。6.通过高效液相法检测灵芝三萜的指纹图谱,对比不同菌株在菌丝体、原基和子实体时期三萜指纹图谱的差异,发现在子实体中的三萜的灵芝酸种类和总三萜含量多于原基和菌丝体。不同菌株间菌丝体、原基和子实体中三萜组分的指纹图谱也存在差异。我们还发现不同的提取方式所获得的三萜组分间的指纹图谱也存在差异。7.以006菌株为例,对比了连翘、银杏、阿司匹林这三种不同的诱导物对灵芝产三萜的诱导作用,我们采用合适的添加浓度和合适的添加方式,结果显示这三种诱导物都能诱导灵芝产三萜的量的增加。以102菌株为例,该菌株在摇瓶10天后发酵液渐渐呈现果冻状,此时改静置培养,并探究了其在正常的液体发酵时,随着天数增加,在发酵液表面形成的菌丝和发酵液内部的菌丝中三萜含量的高低,其变化呈现出先上升后下降的趋势,且表面菌丝中的三萜含量都高于内部菌丝,在25天的表面菌丝中的三萜含量最高。8.克隆得到了几个不同菌株的FPS基因的序列,结果显示相同品种不同菌株间该基因之间也存在着差异。并探究在添加了不同诱导物下随着三萜含量的增高,该基因表达量的变化。结果显示在添加了诱导物的菌丝中该基因的表达量反而降低,推测该基因可能受到底物的反馈抑制作用。