西兰花中萝卜硫苷的提取和纯化研究

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硫代葡萄糖苷(Glucosinolates),简称硫苷,其降解产物种类多样,具备各种生物活性,目前广受关注的是抗癌、提高免疫力的活性。萝卜硫苷(Glucoraphanin)属于硫代葡萄糖苷的其中一类,其主要降解产物萝卜硫素(Sulforaphane)是目前蔬菜中抗癌功效最强的物质。但萝卜硫素不稳定,易挥发,通常采用萝卜硫苷形式制备其产品。从西兰花中提取萝卜硫苷时,其内源黑芥子酶会降解硫苷,因此,需要研究西兰花中萝卜硫苷提取时的灭酶、提取、纯化工艺技术。本文主要以西兰花为原材料,探究其种子中萝卜硫苷的最佳提取工艺,新鲜西兰花的各种灭酶提取萝卜硫苷工艺,以及西兰花粗提液中萝卜硫苷的纯化方法。最终得到以下结论:1、乙醇提取西兰花种子中萝卜硫苷的最佳工艺条件为:乙醇浓度为70%、料液比为1:5、提取温度为70℃、提取时间为20min,提取次数为2次,最终得到每克西兰花种子中萝卜硫苷提取得率为5.41 mg。2、比较Sevag法、单宁酸法、饱和氯化钠法、硅胶法、壳聚糖法对去除新鲜西兰花的萝卜硫苷粗提液中蛋白质的影响,及对萝卜硫苷提取得率的影响,最后综合选择Sevag法。3、通过温度处理、蒸汽处理、微波处理、NaCl浸泡处理和单宁酸打浆处理研究各处理方法对新鲜西兰花中黑芥子酶去酶提取萝卜硫苷的影响,NaCl浸泡处理最终可得0.20 mg/g萝卜硫苷。得到一种氯化钠结合乙醇常温处理西兰花,高得率提取萝卜硫苷的新方法,且与最优方法的得率没有显著差异。为工业化去除新鲜西兰花中的黑芥子酶提取萝卜硫苷提供新的思路。4、采用DEAE Sephadex A-25葡聚糖凝胶吸附纯化西兰花种子粗提液中的萝卜硫苷,经HPLC检测含量仅为0.01 mg/g。该纯化方法效果欠优,需耗费较多的西兰花种子且还需经过制备型HPLC方可得到较多的纯化品。5、使用D201强碱性阴离子交换树脂、D290强碱性阴离子交换树脂、717型强碱性阴离子交换树脂、AB-8大孔树脂、高分子壳聚糖、硅胶、酸性氧化铝、硅藻土、还原铁粉、活性炭粉末对新鲜西兰花的萝卜硫苷粗提液进行静态吸附,吸附率分别为70.54%、86.04%、71.84%、21.9863%、1.85%、22.99%、32.28%、3.92%、69.39%、99.87%。6、选取吸附效果较差的AB-8大孔树脂、硅藻土、高分子壳聚糖进行杂质吸附,吸附液经冷冻干燥得到固体粉末的萝卜硫苷含量比较原液分别提高-18.18%、1.29%和0.18%,该操作对提高萝卜硫苷含量基本无作用;对吸附率效果较好的活性炭粉末、D290强碱性阴离子交换树脂和还原铁粉进行静态解吸附选择洗脱液,活性炭粉末和还原铁粉易吸附萝卜硫苷,但难找到合适的洗脱液进行洗脱;而D290强碱性阴离子交换树脂可使用0.5 M氯化钙溶液洗脱,萝卜硫苷洗脱率可达39.42%。7、选择D290强碱性阴离子交换树脂为柱填料,0.5 M氯化钙溶液为洗脱液,通过动态吸附和洗脱得到相应的动态吸附饱和曲线以及动态解吸附曲线,结果表明:0.5 gD290强碱性阴离子交换树脂柱子可饱和吸附萝卜硫苷1.08 mg;在此基础上0.5 M氯化钙最终可洗脱得到1.03 mg萝卜硫苷,洗脱率最终达到95.36%。8、洗脱液加入等体积等浓度的碳酸钾溶液进行去除钙离子后,萝卜硫苷的回收率为56.67%,相比较去除钙离子前含量提高了34.23%,比未进行纯化的萝卜硫苷粗提液冻干粉中的含量提高了19.81%。
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