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流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis, JE)是由流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)引起的一种人兽共患性传染病。JEV主要流行于中国、亚洲东南部、印度、西太平洋等地区,并且在世界范围内持续蔓延,该病不仅严重危害人类的健康,而且给养猪业造成严重的损失。因此,建立一种快速、准确的检测方法对于该病的诊断和控制具有重要意义。JEV最经典的检测方法有乳鼠脑内接种法和细胞分离法,但这两种方法所需要的时间较长；乳胶凝集试验灵敏度不高；ELISA不适合早期诊断；普通PCR方法只能定性。因此,非常有必要建立一种快速、敏感的检测JEV早期感染的方法。与上述方法相比,荧光定量PCR具有很多明显的优势：快速、灵敏度高、特异性好及可以定量等。为建立流行性乙型脑炎病毒(JEV)的定量检测方法,本实验根据JEV的E基因保守序列设计一对特异性引物及探针,并以E基因重组质粒作为标准品,经过优化引物和探针的浓度及退火温度,确立了合适的反应体系及程序,建立了检测JEV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,该方法敏感性高,在108拷贝/μL到101拷贝/μL之间具有良好的线性关系,相关系数为0.996,扩增效率为99.4%。该方法的灵敏度可达到10个拷贝/μL,是常规PCR灵敏度的100倍。将JEV进行十倍梯度稀释后提RNA、反转录,进行荧光定量PCR反应,所能检测到的最低稀释度为4.5×101TCID50/mL。该方法特异性强,对其它相关猪病病毒如脑心肌炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒和猪细小病毒的检测显示均为阴性。本方法重复性好,重复性试验表明该方法的组间和组内的变异系数均小于2%,具有较好的重复性。利用该方法检测人工感染JEV猪体内的病毒血症,并将该方法与JEV传统病毒分离方法进行比较,结果表明该方法与乳鼠脑内接种方法灵敏度相同,较细胞分离方法灵敏度高。并且利用该方法对JEV感染小鼠内脏的病毒载量进行检测,初步探索JEV在小鼠体内的分布情况。本研究可以作为临床检测JEV病毒及评价疫苗保护效力的检测方法,对研究JEV的致病性具有重要价值。