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前列腺癌是男性泌尿生殖系统中常见的恶性肿瘤,但其发病分子机制尚未完全阐明。近年来研究发现肿瘤形成的另一重要因素与90K/Mac-2BP的异常表达有关。正常情况下,许多分泌性上皮都表达低水平的90K/Mac-2BP,而在相应的肿瘤组织中,90K/Mac-2BP过表达。本研究通过蛋白质组学技术证实在前列腺癌组织中90K/Mac-2BP蛋白过量表达,正常前列腺中低表达。90K/Mac-2BP蛋白的过度表达在前列腺癌的发生、发展过程中起着重要作用。因此,本研究试图探讨90K/Mac-2BP对前列腺癌PC-3细胞的生长影响。RNAi又称RNA干扰(RNA interference, RNAi),能够可靠的干扰目的基因表达,在目前基因治疗方面成为研究的热点之一。其基本原理是：目的基因被小双链RNA特异性地阻断以后,目的基因被高效地阻抑,降解mRNA,出现特定基因缺失,RNAi是在RNA水平抑制目的基因表达。RNA干扰技术具有较强的基因封闭作用,易于摄取、转染稳定并且效率高,该技术与其他的基因技术相比有明显的优势。该研究采用90K/Mac-2BP sh RNA慢病毒可以在真核细胞中稳定表达。90K/Mac-2BP sh RNA慢病毒是可以在哺乳动物细胞中快速且高拷贝转录小片断RNA(<400nt)的载体,90K/Mac-2BP sh RNA慢病毒引起目的基因功能失活的原因是目的基因受到特异性的封闭。在慢病毒Agel和EcoRI酶切位点之间插入外源性DNA片断,构建90K/Mac-2BP干扰载体,通过转染导入前列腺癌PC-3细胞株中,了解90K/Mac-2BP干扰载体对90K/Mac-2BP表达的影响,然后观察90K/Mac-2BP被拮抗后的前列腺癌PC-3细胞生长活性,探索90K/Mac-2BP在前列腺癌发病中的作用机制。采用Western bolt、RT-PCR、酶联免疫吸附实验和流式细胞检测等验证90K/Mac-2BP干扰载体显著抑制PC-3细胞中90K/Mac-2BP mRNA转录和蛋白表达,抑制肿瘤细胞生长,诱导肿瘤细胞凋亡。酶联免疫吸附实验证实前列腺癌细胞白介素1、6分泌减少。结果提示90K/Mac-2BP与前列腺癌的发生密切相关,90K/Mac-2BP促进了前列腺癌细胞的发生与生长,它可能是前列腺癌治疗的重要靶点。通过本研究我们发现：(1)通过蛋白质组学技术验证了在前列腺癌细胞株PC-3中90K/Mac-2BP过表达,正常前列腺中低表达。(2)应用启动子成功构建了90K/Mac-2BPshRNA慢病毒的质粒。(3)采用RT-PCR验证了90K/Mac-2BPshRNA慢病毒干扰载体在mRNA水平明显抑制90K/Mac-2BP表达。(4) Western bolt、流式细胞术方法证实90K/Mac-2BPshRNA慢病毒质粒可在蛋白质水平显著抑制90K/Mac-2BP表达。(5)通过流式细胞仪检测细胞调亡的时程变化,发现90K/Mac-2BP表达下调伴随肿瘤细胞生长的抑制,诱导肿瘤细胞凋亡。(6)免疫吸附实验证实前列腺癌细胞白介素1、6分泌减少,免疫受抑制。